| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-14页 |
| ·实现病毒样颗粒的高效制备有助于降低疫苗成本、促进推广应用 | 第8-9页 |
| ·HPV引起的子宫颈癌危害严重 | 第8页 |
| ·HPV疫苗研究进展 | 第8-9页 |
| ·甲醇酵母系统是应用广泛的异源蛋白表达系统，在HPV病毒样颗粒制备中具有诱人前景 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第9-10页 |
| ·汉逊酵母表达系统 | 第10页 |
| ·HPV L1在酵母中的表达研究 | 第10页 |
| ·毕赤酵母启动子在异源基因表达中应用的研究进展 | 第10-12页 |
| ·本课题主要研究内容、目的及意义 | 第12-14页 |
| ·研究主要内容 | 第12页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第12-14页 |
| 第二章 利用毕赤酵母翻译延伸因子1-a启动子在毕赤酵母中表达异源蛋白 | 第14-28页 |
| ·前言 | 第14页 |
| ·实验材料与方法 | 第14-22页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-22页 |
| ·实验结果 | 第22-26页 |
| ·PCR扩增TEF1-a启动子、GFP基因和HPV16 L1基因结果 | 第22-23页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·GFP的表达 | 第24页 |
| ·毕赤酵母在不同碳源培养基中的生长曲线 | 第24-25页 |
| ·HPV16L1蛋白的表达 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 第三章 甲醛脱氢酶(FLD)启动子在毕赤酵母中的应用研究 | 第28-40页 |
| ·前言 | 第28页 |
| ·实验材料与方法 | 第28-36页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·PCR扩增FLD启动子 | 第36页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·GFP表达 | 第37-38页 |
| ·毕赤酵母在不同碳氮源培养基中的生长曲线 | 第38页 |
| ·不同碳氮源组合培养基中HPV16 L1表达 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第四章 联合应用AOX1启动子和TEF1-a启动子在毕赤酵母中共表达异源蛋白 | 第40-55页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·实验材料与方法 | 第40-48页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·实验结果与讨论 | 第48-53页 |
| ·PCR扩增HPV16 L1(M)基因结果 | 第48-49页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pPinkAOX1-HPV16 L1(M)/TEF1-HPV16 L1在毕赤酵母中的表达 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pHanAOX1-GFP在毕赤酵母重组菌pPinkTEF1-HPV16 L1中的表达 | 第51-53页 |
| ·重组质粒pHanAOXl-HPV16 L1在毕赤酵母重组菌pPinkTEFl-HPV16 L1中的表达 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第五章 用于异源蛋白表达的通用载体在毕赤酵母和汉逊酵母中的应用 | 第55-75页 |
| ·前言 | 第55页 |
| ·实验材料与方法 | 第55-64页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-72页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第64-66页 |
| ·汉逊酵母rDNA及ARS元件对质粒在毕赤酵母和汉逊酵母细胞中转化效率的作用分析 | 第66-68页 |
| ·重组质粒pHanMOX-GFP转化毕赤酵母及汉逊酵母启动子P_(MOX)指导下的GFP表达 | 第68-70页 |
| ·利用毕赤酵母启动子AOX1、TEF1、FLD以及汉逊酵母启动子MOX分别在毕赤酵母和汉逊酵母中表达GFP蛋白 | 第70-71页 |
| ·重组质粒pHanAOX1-HPV16 L1(M)和pHanMOX-HPV 16L1(M)在毕赤酵母和汉逊酵母中的穿梭表达 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录 | 第81-91页 |
| 附录Ⅰ 缩写词 | 第81-82页 |
| 附录Ⅱ 主要试剂 | 第82-83页 |
| 附录Ⅲ 主要溶液的配制 | 第83-88页 |
| 附录Ⅳ 主要仪器 | 第88-89页 |
| 附录Ⅴ 基本实验操作 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 作者简历 | 第92-93页 |
