| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-30页 |
| 1 硝态氮在水稻生长发育过程中的作用 | 第16-18页 |
| ·水稻根际硝化作用 | 第16-17页 |
| ·硝态氮对水稻铵态氮吸收同化的促进作用 | 第17页 |
| ·硝态氮对水稻根系生长发育的促进作用 | 第17-18页 |
| 2 植物对硝态氮吸收的生理机制 | 第18-19页 |
| 3 植物对硝态氮吸收的分子机制 | 第19-25页 |
| ·植物质膜上的低亲和NO_3~-转运蛋白 | 第20-23页 |
| ·植物质膜上的高亲和NO_3~-转运蛋白 | 第23-24页 |
| ·植物液泡膜上的硝酸盐转运蛋白 | 第24-25页 |
| 4 植物NO_3~-转运蛋白基因的表达和转运活性的调控 | 第25-26页 |
| 5 硝态氮(NO_3~-)对钾离子(K~+)运输的影响 | 第26-27页 |
| 6 NO_3~-转运蛋白在爪蟾卵母细胞异源表达系统中的功能检测 | 第27-30页 |
| 第二章 研究的目的意义和技术路线 | 第30-32页 |
| 1 目的意义 | 第30页 |
| 2 技术路线 | 第30-32页 |
| 第三章 OsNPF2.4生物信息学及表达模式分析 | 第32-50页 |
| 1 引言 | 第32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-41页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·水稻和拟南芥中NRT1/PTR(NPF)进化分析 | 第33页 |
| ·OsNPF2.4及其同源基因的表达分析 | 第33-34页 |
| ·OsNPF2.4跨膜拓扑结构分析 | 第34页 |
| ·OsNPF2.4亚细胞定位分析 | 第34-35页 |
| ·eGFP融合表达载体的构建 | 第34页 |
| ·水稻原生质体的获得 | 第34-35页 |
| ·亚细胞定位表达载体的转染 | 第35页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察原生质体 | 第35页 |
| ·OsNPF2.4组织定位分析 | 第35-41页 |
| ·水稻基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·OsNPF2.4组织定位表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·水稻转基因流程 | 第37-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-48页 |
| ·水稻和拟南芥NRT1/PTR(NPF)进化分析 | 第41-42页 |
| ·OsNPF2.4及其同源基因在不同部位中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·OsNPF2.4在不同氮素、缺钾和通氧气处理中的表达分析 | 第43-45页 |
| ·OsNPF2.4跨膜拓扑结构分析 | 第45页 |
| ·OsNPF2.4亚细胞定位分析 | 第45-46页 |
| ·OsNPF2.4组织定位分析 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 OsNPF2.4在爪蟾卵母细胞中的分析 | 第50-64页 |
| 1 引言 | 第50-51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-57页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·OsNPF2.4 cDNA克隆的获得 | 第52页 |
| ·OsNPF2.4蟾卵异源表达载体的构建 | 第52页 |
| ·OsNPF2.4 cRNA的体外合成 | 第52-54页 |
| ·质粒的提取 | 第53页 |
| ·OsNPF2.4和CHL1(AtNPF6.3)cRNA的体外合成 | 第53-54页 |
| ·爪蟾卵母细胞的获得 | 第54-55页 |
| ·cRNA的微注射 | 第55页 |
| ·微注射管的拉制 | 第55页 |
| ·微注射管的标定 | 第55页 |
| ·爪蟾卵母细胞的微注射 | 第55页 |
| ·注射后爪蟾卵母细胞的培养 | 第55-56页 |
| ·NO_3~-的吸收和外排实验 | 第56-57页 |
| ·爪蟾卵母细胞对NO_3~-的吸收实验 | 第56页 |
| ·爪蟾卵母细胞对~(15)NO_3~-的吸收动力学实验 | 第56-57页 |
| ·双电极电压钳 | 第57页 |
| ·爪蟾卵母细胞对NO_3~-的外排实验 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·OsNPF2.4在爪蟾卵母细胞中对NO_3~-的吸收 | 第57-58页 |
| ·OsNPF2.4对NO_3~-的选择性吸收 | 第58-59页 |
| ·OsNPF2.4对NO_3~-吸收的动力学特性 | 第59-60页 |
| ·OsNPF2.4在爪蟾卵母细胞中对NO_3~-的外排 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 第五章 OsNPF2.4敲除对水稻生长的影响 | 第64-92页 |
| 1 引言 | 第64页 |
| 2 材料方法 | 第64-68页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·OsNPF2.4敲除突变体纯合体和插入位点的鉴定 | 第65页 |
| ·水稻木质部伤流液的收集 | 第65-66页 |
| ·水稻体内和伤流液中NO_3~--N和K~+的测定 | 第66页 |
| ·~(15)N吸收和再分配实验 | 第66页 |
| ·植物样品的消化及总凯式氮的测定 | 第66页 |
| ·NO_3~-转运蛋白基因表达分析 | 第66-67页 |
| ·田间农艺学性状的统计 | 第67页 |
| ·花粉育性的观察 | 第67-68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-87页 |
| ·OsNPF2.4敲除突变体的获得与分子鉴定 | 第68-69页 |
| ·OsNPF2.4敲除对~(15)N吸收速率的影响 | 第69-70页 |
| ·OsNPF2.4敲除对水稻生长和氮素积累的影响 | 第70-74页 |
| ·OsNPF2.4敲除对水稻NO_3~-转运蛋白基因表达的影响 | 第74-76页 |
| ·OsNPF2.4敲除对~(15)N-NO_3~-从老叶向其他器官分配的影响 | 第76-77页 |
| ·OsNPF2.4敲除对NO_3~-和K~+转运的影响 | 第77-80页 |
| ·OsNPF2.4敲除对水稻中后期性状的影响 | 第80-87页 |
| ·OsNPF2.4敲除突变体扬花期各部位氮含量 | 第80-81页 |
| ·OsNPF2.4敲除突变体成熟期表型及农艺学性状 | 第81-82页 |
| ·OsNPF2.4敲除对水稻花器官的影响 | 第82-84页 |
| ·OsNPF2.4敲除突变体成熟期各部位生物量和氮含量 | 第84-86页 |
| ·OsNPF2.4敲除突变体成熟期各部位钾含量 | 第86页 |
| ·OsNPF2.4敲除对水稻发芽率的影响 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-92页 |
| ·OsNPF2.4参与了水稻对NO_3~-的吸收 | 第87-88页 |
| ·OsNPF2.4参与了缺N情况下水稻对NO_3~-的再分配 | 第88页 |
| ·OsNPF2.4参与调节水稻对NO_3~--N和K~+的平衡及运输 | 第88-90页 |
| ·OsNPF2.4敲除影响了水稻花粉的育性 | 第90-92页 |
| 第六章 超表达OsNPF2.4对水稻生长的影响 | 第92-104页 |
| 1 引言 | 第92页 |
| 2 材料方法 | 第92-95页 |
| ·实验材料 | 第92页 |
| ·OsNPF2.4超表达载体的构建 | 第92-93页 |
| ·OsNPF2.4超表达水稻转基因流程 | 第93页 |
| ·OsNPF2.4超表达阳性苗的鉴定 | 第93-94页 |
| ·OsNPF2.4超表达株系水培实验 | 第94页 |
| ·OsNPF2.4超表达对相关基因表达的影响 | 第94页 |
| ·OsNPF2.4超表达材料田间实验 | 第94-95页 |
| 3 结果与分析 | 第95-101页 |
| ·OsNPF2.4超表达材料的获得与分子鉴定 | 第95-96页 |
| ·OsNPF2.4超表达对NO_3~-的吸收和生长的影响 | 第96-98页 |
| ·OsNPF2.4超表达对水稻中后期性状的影响 | 第98-101页 |
| 4 讨论 | 第101-104页 |
| 全文结论 | 第104-106页 |
| 补充数据 | 第106-110页 |
| 参考文献 | 第110-120页 |
| 附录 | 第120-136页 |
| 创新点 | 第136-138页 |
| 在读期间发表的论文 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
