| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略语表 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-15页 |
| ·抗HIV-1的趋化因子及其类似物 | 第11-13页 |
| ·阻断CCR5的抑制剂——RANTES及其衍生物 | 第11-12页 |
| ·阻断CXCR4的抑制剂——SDF-1 | 第12-13页 |
| ·APOBEC3G | 第13页 |
| ·Ⅰ型干扰素和2',5'寡腺苷酸合成酶 | 第13-14页 |
| ·小结与展望 | 第14-15页 |
| 第二章 材料 | 第15-20页 |
| ·菌株、质粒和细胞株 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16-17页 |
| ·常用试剂配制 | 第17-19页 |
| ·REAL-TIME PCR引物 | 第19页 |
| ·引物处理 | 第19-20页 |
| 第三章 方法 | 第20-33页 |
| ·构建原核表达质粒PET15B-PEP-1-VMIP-Ⅱ | 第20-25页 |
| ·质粒扩增及抽提 | 第20-21页 |
| ·质粒pET15b的酶切和大片段DNA回收 | 第21-22页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·将vMIP-Ⅱ基因克隆至pGEM-T easy载体 | 第23-25页 |
| ·融合蛋白PEP-1-VMIP-Ⅱ的表达纯化及鉴定 | 第25-28页 |
| ·诱导重组蛋白pep-1-vMIP-Ⅱ诱导及优化 | 第25-26页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第26页 |
| ·融合蛋白pep-1-vMIP-Ⅱ的纯化和鉴定 | 第26页 |
| ·BCA蛋白定量 | 第26-27页 |
| ·Western-blot鉴定目的蛋白 | 第27-28页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测融合蛋白的穿膜功能 | 第28-30页 |
| ·细胞复苏 | 第28页 |
| ·细胞换液和传代 | 第28页 |
| ·细胞的冻存 | 第28-29页 |
| ·细胞计数 | 第29页 |
| ·检测融合蛋白的穿膜实验 | 第29-30页 |
| ·QRT-PCR检测JURKAT细胞/HMEC-1细胞中ARGS MRNA水平的表达 | 第30-32页 |
| ·处理细胞 | 第30页 |
| ·细胞总RNA提取与浓度测定 | 第30-31页 |
| ·逆转录PCR | 第31页 |
| ·qRT-PCR测定抗HIV相关基因的表达 | 第31-32页 |
| ·技术路线图 | 第32-33页 |
| 第四章 实验结果 | 第33-44页 |
| ·目的基因PCR扩增及TA克隆 | 第33-34页 |
| ·原核表达载体的双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·DNA测序 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白PEP-1-VMIP-Ⅱ的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析及优化 | 第36-38页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第38页 |
| ·激光共聚焦检测穿膜情况 | 第38页 |
| ·QRT-PCR检测融合蛋白作用于JURKAT细胞ARGS MRNA的表达水平 | 第38-41页 |
| ·QRT-PCR检测融合蛋白作用于HMEC-1细胞ARGS MRNA的表达水平 | 第41-44页 |
| 第五章 实验讨论 | 第44-47页 |
| ·细胞穿膜肽 | 第44-45页 |
| ·体内主要的抗HIV基因 | 第45页 |
| ·KSHV在抗HIV感染方面可能的作用 | 第45-46页 |
| ·VMIP-Ⅱ基因在激活抗HIV基因表达方面的作用 | 第46-47页 |
| 第六章 小结与展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 导师评阅表 | 第53页 |
