| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| ·PRRSV的生物学特征 | 第13-17页 |
| ·PRRSV基因组结构以及亚基因的组成 | 第13-15页 |
| ·PRRSV主要的结构蛋白 | 第15-16页 |
| ·PRRSV的病毒侵入 | 第16-17页 |
| ·ORF5A的研究进展 | 第17-19页 |
| ·ORF5A的发现 | 第18页 |
| ·EAV中ORF5A的重要性 | 第18页 |
| ·PRRSV 中 PRF5a 的必需性 | 第18-19页 |
| ·反向遗传操作技术在动脉炎病毒属中的应用现状 | 第19-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PRRSV ORF5A突变株的构建及生物学分析 | 第21-31页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·毒株、菌株、细胞 | 第21页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·ORF5A相对位置分析 | 第21-22页 |
| ·引物设计及合成 | 第22页 |
| ·定点突变质粒的构建 | 第22-24页 |
| ·病毒的拯救 | 第24-25页 |
| ·拯救病毒感染性克隆缺失株RHUN4-F112-Δ5A鉴定及生物学分析 | 第25-27页 |
| ·结果 | 第27-29页 |
| ·拯救病毒PT-PCR检测结果 | 第27-28页 |
| ·拯救病毒突变位点鉴定结果 | 第28页 |
| ·拯救病毒蛋白检测结果 | 第28页 |
| ·拯救病毒病变观察的结果 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第三章 PRRSV ORF5A细胞系的建立 | 第31-39页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·细胞、质粒、菌株 | 第31页 |
| ·主要的试剂及仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·目的片段表达载体的构建 | 第31-34页 |
| ·含有目的片段的MARC-145细胞系的建立 | 第34-35页 |
| ·含有目的片段的MARC-145细胞系的鉴定 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-38页 |
| ·表达载体与辅助质粒的酶切鉴定结果 | 第36页 |
| ·构建质粒过程中的鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒 5A-PWPXL的鉴定结果 | 第37页 |
| ·细胞系的荧光结果 | 第37页 |
| ·细胞系的GFP蛋白的检测结果 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 缺陷株在 5AM细胞系上拯救及生物学分析 | 第39-48页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·细胞 | 第39页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·补偿实验 | 第39-40页 |
| ·缺陷株在MARC-145细胞上的拯救及非冻融传代 | 第40-41页 |
| ·缺失株在 ORF5a 的 MARC-145 细胞系上拯救的鉴定及生物学特性分析 | 第41页 |
| ·ORF5a 蛋白免疫原性检测 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-45页 |
| ·基因组的检测结果 | 第42-43页 |
| ·突变位点的鉴定 | 第43页 |
| ·细胞病变的观察 | 第43-44页 |
| ·细胞病变的观察 | 第44页 |
| ·ORF5a 蛋白的免疫原性鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
