| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-14页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 1 转基因技术与转基因动物 | 第9页 |
| 2 转基因克隆技术 | 第9-11页 |
| 3 转基因家畜的研究进展 | 第11页 |
| 4 高繁殖力目标基因BMPR-IB | 第11-13页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第13-14页 |
| 第二章 研究正文 | 第14-42页 |
| 1 引言 | 第14页 |
| 2 实验材料 | 第14-26页 |
| ·材料 | 第14-18页 |
| ·实验动物 | 第14页 |
| ·实验常用试剂、质粒及菌株 | 第14页 |
| ·主要试剂的配制 | 第14-16页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第16页 |
| ·显微操作针的制备 | 第16-18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·载体构建及表达 | 第18-22页 |
| ·胎儿成纤维细胞系建立 | 第22页 |
| ·阳性细胞株的获取 | 第22-24页 |
| ·转基因克隆胚胎的获得 | 第24页 |
| ·体细胞核移植 | 第24-25页 |
| ·转基因胚胎的移植 | 第25-26页 |
| ·妊娠检测 | 第26页 |
| 3 实验结果 | 第26-33页 |
| ·BMPR-IB基因CDS片段的获得 | 第26-27页 |
| ·BMPR-IB基因定点突变 | 第27页 |
| ·BMPR-IB基因插入 | 第27页 |
| ·插入Neo基因后构建载体pEF-BMPR-IB-Neo | 第27-28页 |
| ·重组载体pEF-BMPR-IB-Neo完整性检测 | 第28页 |
| ·质粒线性化结果 | 第28页 |
| ·质粒细胞水平检测分析 | 第28-29页 |
| ·胎儿细胞系建立 | 第29页 |
| ·脂质体转染后的细胞汇合度及用G418筛选细胞状态 | 第29-30页 |
| ·转基因阳性细胞克隆挑取及鉴定 | 第30-31页 |
| ·阳性细胞PCR检测鉴定结果 | 第31页 |
| ·RT-PCR检测阳性细胞及基因突变点 | 第31-32页 |
| ·卵母细胞成熟判定 | 第32页 |
| ·卵母细胞去核的效果 | 第32页 |
| ·囊胚计数及发育状况 | 第32-33页 |
| 4 分析与讨论 | 第33-42页 |
| ·猪BMPR-IB基因的研究进展 | 第33页 |
| ·重组载体构建及表达 | 第33-34页 |
| ·阳性细胞系建立和应用 | 第34-35页 |
| ·卵母细胞成熟条件和去核的预处理 | 第35-36页 |
| ·卵母细胞的去核及注核 | 第36-38页 |
| ·转基因胚胎的融合与激活 | 第38-39页 |
| ·重构胚的体外培养 | 第39页 |
| ·胚胎移植 | 第39-40页 |
| ·克隆猪出生率和转基因猪的鉴定 | 第40-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
