长双歧杆菌蔗糖磷酸化酶定点突变及其催化机理的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·碳水化合物酶 | 第9-13页 |
| ·糖苷类化合物的概述 | 第9-10页 |
| ·碳水化合物酶的分类 | 第10-13页 |
| ·蔗糖磷酸化酶 | 第13-16页 |
| ·反应机理及分类 | 第13-14页 |
| ·性质及结构 | 第14-15页 |
| ·蔗糖磷酸化酶的应用 | 第15-16页 |
| ·定点突变技术 | 第16-18页 |
| ·盒式定点突变 | 第16页 |
| ·寡核苷酸引物介导的定点突变 | 第16-17页 |
| ·PCR 介导的定点突变 | 第17-18页 |
| ·课题研究的背景和意义、主要内容 | 第18-20页 |
| ·研究意义 | 第18-19页 |
| ·课题研究的主要内容 | 第19-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·实验用主要试剂 | 第20-21页 |
| ·实验用主要仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·模板质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·全质粒 PCR 定点突变 | 第23-25页 |
| ·突变体重组子的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·酶学性质表征 | 第27-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-46页 |
| ·突变体的构建 | 第31-33页 |
| ·碱裂解提取 DNA 模板 | 第31页 |
| ·突变体的全质粒 PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·突变体单克隆的菌落验证 | 第32页 |
| ·突变体序列分析 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的制备 | 第33-36页 |
| ·目的蛋白的诱导与表达 | 第33-35页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的冻干 | 第36页 |
| ·蛋白的酶学性质表征 | 第36-46页 |
| ·蔗糖磷酸化酶蛋白浓度及初始速率的测定 | 第36-37页 |
| ·DNS 标准曲线的绘制 | 第37页 |
| ·动力学参数的测定 | 第37-38页 |
| ·过渡态自由能的测定 | 第38-40页 |
| ·温度对着蔗糖磷酸化酶活性及稳定性的影响 | 第40-42页 |
| ·pH 值对蔗糖磷酸化酶活性及稳定性的影响 | 第42-44页 |
| ·蔗糖磷酸化酶金属离子稳定性 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 作者简介 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
