| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 引言 | 第20-22页 |
| ·本研究的实用价值和理论意义 | 第20页 |
| ·国内外研究现状 | 第20-21页 |
| ·本研究拟解决的问题 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·质粒、菌种、细胞株和实验动物 | 第22页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第22页 |
| ·主要溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-34页 |
| ·植原体免疫主导膜蛋白A原核表达载体的构建与鉴定 | 第24-26页 |
| ·IdpA蛋白在原核表达载体中的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·重组的蛋白IdpA的性质分析 | 第27页 |
| ·Ni-NTA树脂亲和层析纯化IdpA蛋白 | 第27-29页 |
| ·IdpA蛋白抗原的单克隆抗体制备 | 第29-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-48页 |
| ·IdpA蛋白重组质粒的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| ·IdpA蛋白基因的PCR扩增与鉴定 | 第34页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)-IdpA的构建和鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白IdpA的诱导表达及鉴定 | 第35-38页 |
| ·重组菌生长曲线测定 | 第35-36页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第36页 |
| ·重组菌的Western blotting鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组菌的表达条件优化 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白IdpA的分析 | 第38-40页 |
| ·目的蛋白IdpA可溶性分析 | 第38页 |
| ·目的蛋白IdpA理化特性分析 | 第38-40页 |
| ·IdpA蛋白的Ni-NTA树脂亲和层析纯化 | 第40-42页 |
| ·IdpA蛋白的洗涤洗脱 | 第40-41页 |
| ·IdpA蛋白的复性和浓缩 | 第41-42页 |
| ·BCA法测IdpA蛋白浓度 | 第42页 |
| ·IdpA蛋白抗原的单克隆抗体制备 | 第42-48页 |
| ·抗血清的间接ELISA效价测定 | 第42-43页 |
| ·抗血清的Western blot特异性分析 | 第43-44页 |
| ·SP2/0细胞培养 | 第44页 |
| ·饲养层细胞制备 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤的ELISA筛选 | 第45-46页 |
| ·单克隆抗体分析 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·IdpA蛋白重组质粒的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白IdpA的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白IdpA的纯化 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
| 在读期间参与发表的学术论文 | 第62页 |