基因枪和农杆菌介导的抗冻基因KN2对普通小麦品种的遗传转化
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-32页 |
| 1 引言 | 第11-12页 |
| 2 作物抗冻基因工程研究进展 | 第12-19页 |
| ·低温环境胁迫下植物的生理生化反应机制 | 第13-16页 |
| ·低温胁迫对生物膜系统的影响 | 第13页 |
| ·低温胁迫对呼吸作用、光合作用的影响 | 第13-14页 |
| ·低温胁迫对活性氧的影响 | 第14-15页 |
| ·低温胁迫对植物渗透调节物质的影响 | 第15-16页 |
| ·低温胁迫下植物的分子反应机制 | 第16-19页 |
| ·抗氧化酶相关基因 | 第16-18页 |
| ·抗冻蛋白基因 | 第18页 |
| ·冷诱导基因 | 第18-19页 |
| 3 小麦组织培养研究进展 | 第19-24页 |
| ·小麦幼胚组织培养转化体系优化 | 第20-22页 |
| ·小麦花药组织培养转化体系的优化 | 第22页 |
| ·小麦成熟胚转化体系的优化 | 第22-23页 |
| ·小麦幼穗组织培养转化 | 第23-24页 |
| 4 小麦遗传转化主要方法 | 第24-28页 |
| ·基因枪转化法 | 第24-26页 |
| ·农杆菌介导法 | 第26-27页 |
| ·原生质体转化法 | 第27页 |
| ·其他方法 | 第27-28页 |
| 5 小麦遗传转化的报告基因和选择标记基因 | 第28-30页 |
| ·报告基因 | 第28-29页 |
| ·选择标记基因 | 第29-30页 |
| 6 转基因小麦的分子检测 | 第30-31页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 基因枪轰击中几个参数的优化 | 第32-37页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| ·小麦材料 | 第32页 |
| ·轰击前的准备及处理 | 第32页 |
| ·愈伤诱导 | 第32页 |
| ·高渗处理 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·目的基因与质粒 | 第33页 |
| ·金粉的制备 | 第33页 |
| ·轰击参数 | 第33-34页 |
| ·轰击后愈伤组织的处理 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-35页 |
| ·金粉浓度对小麦基因转化的影响 | 第34页 |
| ·轰击次数对小麦基因转化的影响 | 第34-35页 |
| ·靶距对小麦基因转化的影响 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 基因枪法介导小麦KN2基因的转化 | 第37-48页 |
| 1 材料与方法 | 第37-45页 |
| ·小麦品种 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·实验试剂及材料 | 第37-38页 |
| ·实验常用溶液 | 第38页 |
| ·转化载体 | 第38-40页 |
| ·幼胚组织培养方法 | 第40-41页 |
| ·接种 | 第40页 |
| ·转化 | 第40页 |
| ·分化筛选 | 第40页 |
| ·再生 | 第40页 |
| ·植株的春化和移栽 | 第40-41页 |
| ·基因枪转化方法 | 第41-43页 |
| ·质粒向大肠杆菌的转化 | 第41页 |
| ·质粒制备 | 第41页 |
| ·微弹的制备 | 第41-42页 |
| ·渗透处理和微弹轰击 | 第42-43页 |
| ·转基因To代植株PCR检测 | 第43-45页 |
| ·抗性再生苗总DNA提取 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·PCR体系 | 第45页 |
| 2 结果统计与分析 | 第45-48页 |
| ·基因枪法介导小麦幼胚转化过程 | 第45-46页 |
| ·基因枪法介导小麦幼胚PCR检测结果 | 第46-48页 |
| 第四章 农杆菌介导小麦KN2基因的转化 | 第48-55页 |
| 1 材料与方法 | 第48-52页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验常用溶液 | 第48页 |
| ·仪器设备 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·农杆菌转化方法 | 第49-51页 |
| ·质粒向农杆菌的转化 | 第49-50页 |
| ·农杆菌标准培养物的制备 | 第50页 |
| ·取样及灭菌方法 | 第50页 |
| ·农杆菌转化幼胚愈伤组织流程 | 第50-51页 |
| ·转基因To代植株PCR检测 | 第51-52页 |
| ·抗性再生苗总DNA提取 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·PCR体系 | 第52页 |
| 2 结果统计与分析 | 第52-55页 |
| ·农杆菌法侵染小麦愈伤组织转化过程 | 第52-53页 |
| ·农杆菌法转KN2小麦植株PCR检测结果 | 第53-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-58页 |
| 1 基因枪法介导的小麦遗传转化 | 第55-56页 |
| 2 农杆菌法介导的小麦遗传转化 | 第56-57页 |
| 3 转基因方法的快速发展 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-71页 |
| 附录：常用培养基及其它试剂和抗生素母液配方 | 第71-74页 |
| 1 MS培养基母液配制 | 第71-72页 |
| 2 MGL培养基 | 第72页 |
| 3 部分抗生素母液及植物激素母液配制方法 | 第72-73页 |
| 4 常用缓冲液、试剂配方 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
