| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| ·IFITM 的研究进展 | 第12-16页 |
| ·IFITM 基因家族的简介 | 第12-13页 |
| ·IFITM 的生物活性 | 第13-16页 |
| ·IFITM 调控细胞的生长和分化 | 第14页 |
| ·IFITM 蛋白的抗病毒活性 | 第14-15页 |
| ·IFITM 抗肿瘤细胞的增殖 | 第15-16页 |
| ·乙型脑炎及乙型脑炎病毒简介 | 第16-18页 |
| ·乙型脑炎的简介 | 第16页 |
| ·乙型脑炎病毒 | 第16-18页 |
| ·JEV 的结构和基因组 | 第16-18页 |
| ·JEV 的 E 蛋白简介 | 第18页 |
| ·JEV 的毒力及致病机理 | 第18页 |
| ·JEV 细胞模型的选用 | 第18页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-40页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·耗材器具 | 第21页 |
| ·试剂与耗材的准备 | 第21-23页 |
| ·试剂与耗材准备 | 第21-23页 |
| ·预备耗材处理方法 | 第21页 |
| ·主要试剂配制方法 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-40页 |
| ·细胞培养 | 第24页 |
| ·基因克隆 | 第24-30页 |
| ·细胞总 RNA 提取及纯化 | 第24-25页 |
| ·RNA 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第25页 |
| ·目的基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·目的DNA 片段琼脂糖胶回收 | 第26-27页 |
| ·感受态的制备 | 第27页 |
| ·目的基因与 T 载体的连接 | 第27-28页 |
| ·T-IFITM 重组质粒转化 | 第28页 |
| ·克隆筛选与鉴定 | 第28-30页 |
| ·猪 IFITM 全长基因的克隆和染色体定位 | 第30-31页 |
| ·组织中总 DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·猪 IFITM 全长基因的克隆 | 第31页 |
| ·NCBI BLAST 基因组 | 第31页 |
| ·猪 IFITM 基因生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·数据收集 | 第31-32页 |
| ·多序列对比 | 第32页 |
| ·进化树构建 | 第32页 |
| ·组织表达差异分析 | 第32-34页 |
| ·各组织总 RNA 提取及纯化 | 第32-33页 |
| ·RNA 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第33页 |
| ·基因克隆 | 第33-34页 |
| ·IFITM 原核表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·表达质粒酶切反应与DNA 片段的回收 | 第34页 |
| ·目的基因与原核表达载体的连接及转化 | 第34页 |
| ·重组子筛选及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组子转化表达菌株 | 第35页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物SDS-PAGE 分析 | 第35-37页 |
| ·IFITM 真核表达载体的构建 | 第37页 |
| ·检测过量 IFITM 蛋白对乙脑病毒感染细胞的影响 | 第37-38页 |
| ·瞬时转染和病毒感染 | 第37页 |
| ·细胞形态学观察 | 第37-38页 |
| ·Western Blot 检测 | 第38页 |
| ·pcDNA3.1(+)-IFITM 稳定表达细胞系筛选 | 第38-40页 |
| ·稳定转染 | 第38-39页 |
| ·RNA 的提取 | 第39页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-59页 |
| ·细胞培养 | 第40页 |
| ·猪 IFITM 基因克隆 | 第40-44页 |
| ·细胞总 RNA 提取及纯化 | 第40-41页 |
| ·猪 IFITM 基因克隆的结果 | 第41-43页 |
| ·猪 IFITM 基因序列提交 | 第43-44页 |
| ·猪 IFITM 全长基因的克隆和染色体定位 | 第44-46页 |
| ·猪肝组织总 DNA 提取及 IFITM 全长基因克隆 | 第44-45页 |
| ·猪 IFITM 基因结构与染色体的定位 | 第45-46页 |
| ·猪 IFITM 基因生物信息学分析 | 第46-51页 |
| ·跨膜域分析 | 第46-47页 |
| ·多序列对比 | 第47-49页 |
| ·系统进化树 | 第49-51页 |
| ·猪 IFITM 基因在不同组织表达差异性 | 第51-52页 |
| ·组织总 RNA 提取及纯化 | 第51页 |
| ·组织表达差异 | 第51-52页 |
| ·IFITM 原核表达载体的构建结果 | 第52-53页 |
| ·IFITM 真核表达载体的构建结果 | 第53-55页 |
| ·猪 IFITM 蛋白对乙脑病毒感染细胞的表观影响 | 第55-57页 |
| ·细胞形态学分析 | 第55-56页 |
| ·Western Blot 检测结果 | 第56-57页 |
| ·pcDNA3.1(+)-IFITM 稳定表达细胞系的验证 | 第57-59页 |
| ·G418 筛选稳定表达细胞系 | 第57页 |
| ·RNA 的提取及纯化 | 第57-58页 |
| ·猪 IFITM 基因的 RT-PCR 结果 | 第58-59页 |
| 5.结论与讨论 | 第59-61页 |
| ·猪 IFITM 基因的研究 | 第59-60页 |
| ·猪 IFITM 基因克隆和定位 | 第59页 |
| ·生物信息学分析 | 第59-60页 |
| ·组织表达差异分析 | 第60页 |
| ·猪 IFITM 蛋白功能的研究 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白原核表达的分析 | 第60页 |
| ·病毒感染分析与稳定表达细胞系建立 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| Abstract | 第68-69页 |
