| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1 副猪嗜血杆菌生物学特征 | 第9-11页 |
| 2 副猪嗜血杆菌流行病学及分型 | 第11-15页 |
| ·血清学分型 | 第11-12页 |
| ·基因型分型 | 第12-15页 |
| 3 基因工程方法构建细菌突变株的研究进展 | 第15-19页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第15-16页 |
| ·基于载体构建的突变体 | 第16页 |
| ·DNA 标签法 | 第16-17页 |
| ·基因打靶技术 | 第17-19页 |
| 4 致病因子的研究进展 | 第19-22页 |
| ·荚膜 | 第19页 |
| ·脂多糖 | 第19-20页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第20-22页 |
| ·外膜蛋白 | 第22页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌 tbpB 基因的 PCR-RFLP 分型 | 第23-33页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 试验材料 | 第23-24页 |
| 3 试验方法 | 第24-25页 |
| ·DNA 提取及 PCR 扩增 | 第24页 |
| ·限制性片段长度多态性（RFLP）分析 | 第24-25页 |
| 4 结果 | 第25-30页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第25页 |
| ·生物学软件对标准菌株的 RFLP 分析 | 第25-27页 |
| ·AluⅠ、AvaⅡ和 RsaⅠ三种限制性内切酶酶切后的琼脂糖电泳图 | 第27-29页 |
| ·临床分离株的 RFLP 分析 | 第29-30页 |
| 5 讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌 tbpB 基因缺失株的外源打靶载体的构建 | 第33-47页 |
| 1 前言 | 第33页 |
| 2 试验材料 | 第33-36页 |
| ·菌株、质粒、培养基 | 第33-34页 |
| ·分子生物学试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·常规溶液、缓冲液的配制 | 第35-36页 |
| ·引物 | 第36页 |
| 3 试验方法 | 第36-42页 |
| ·细菌的增殖及副猪嗜血杆菌基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物和酶切产物的回收与纯化 | 第37-38页 |
| ·质粒的制备 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） | 第39页 |
| ·副猪嗜血杆菌 Nagasaki 株 tbpB 基因外源打靶基因的构建 | 第39-41页 |
| ·外源打靶载体的构建 | 第41-42页 |
| ·打靶载体在宿主菌的稳定性分析 | 第42页 |
| 4 结果 | 第42-46页 |
| ·目的基因的扩增和测序 | 第42-43页 |
| ·反向 PCR 构建外源打靶基因 | 第43-44页 |
| ·重组质粒 pEM-△tbpB 的构建 | 第44-46页 |
| ·打靶载体稳定性分析 | 第46页 |
| 5 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌 tbpB 基因缺失株的构建 | 第47-57页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 试验材料 | 第47页 |
| ·菌株、质粒、培养基 | 第47-48页 |
| ·主要实验仪器 | 第48页 |
| ·常规溶液、缓冲液的配制 | 第48页 |
| 3 试验方法 | 第48-51页 |
| ·自然转化法 | 第48-49页 |
| ·电转法 | 第49-50页 |
| ·膜接合转移 | 第50页 |
| ·突变体的筛选鉴定 | 第50-51页 |
| 4 结果 | 第51-53页 |
| 5 讨论 | 第53-56页 |
| 6 下一步设想 | 第56-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 导师简介 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
