| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| ·球孢白僵菌 | 第14-17页 |
| ·球孢白僵菌的生物学特性 | 第14页 |
| ·球孢白僵菌的致病机理 | 第14-16页 |
| ·基因工程在球孢白僵菌中的应用 | 第16-17页 |
| ·球孢白僵菌在生物防治中的应用特点 | 第17页 |
| ·疏水蛋白 | 第17-22页 |
| ·疏水蛋白简介 | 第17-18页 |
| ·疏水蛋白的自我组装特性 | 第18-19页 |
| ·疏水蛋白的功能 | 第19-22页 |
| ·丝状真菌的基因工程研究 | 第22-27页 |
| ·丝状真菌遗传转化方法简介 | 第22-23页 |
| ·DNA 水平的基因工程研究 | 第23-25页 |
| ·RNA 水平的基因工程研究 | 第25-27页 |
| ·引言 | 第27-29页 |
| ·研究目的和意义 | 第27-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 球孢白僵菌 HsbA 蛋白的 cDNA 克隆及 DNA 侧翼片段的获取 | 第29-46页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·菌株和载体 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·主要缓冲液和培养基的配方 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-38页 |
| ·染色体步移法 | 第30-32页 |
| ·RACE 法 | 第32-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-44页 |
| ·球孢白僵菌 HsbA 蛋白 cDNA 序列分析 | 第38-41页 |
| ·球孢白僵菌HsbA蛋白DNA序列分析 | 第41-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 球孢白僵菌 HsbA 基因的诱导表达分析 | 第46-55页 |
| ·试验材料 | 第46-47页 |
| ·供试菌株 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·主要缓冲液和培养基的配方 | 第47页 |
| · | 第47-48页 |
| ·样品处理 | 第47页 |
| ·总 RNA 提取及 cDNA 第一链的合成 | 第47页 |
| ·荧光定量 PCR | 第47-48页 |
| ·数据分析 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-53页 |
| ·荧光定量引物特异性检测 | 第48-50页 |
| ·HsbA 基因在不同温度下的相对表达量分析 | 第50-51页 |
| ·HsbA 基因在不同诱导物下的相对表达量分析 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·荧光定量 PCR 结果的影响因素分析 | 第53页 |
| ·HsbA 基因在不同温度下的相对表达量分析 | 第53-54页 |
| ·HsbA 基因在不同诱导物下的相对表达量分析 | 第54-55页 |
| 第四章 球孢白僵菌 HsbA 蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 | 第55-66页 |
| ·试验材料 | 第55-57页 |
| ·菌株和载体 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·主要缓冲液和蛋白胶的配方 | 第56-57页 |
| ·试验方法 | 第57-60页 |
| ·引物的设计与合成 | 第57页 |
| ·重组克隆质粒的构建及验证 | 第57页 |
| ·重组表达质粒的构建及验证 | 第57页 |
| ·HsbA 蛋白的原核表达与纯化 | 第57-59页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第59页 |
| ·Western 免疫印迹 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-65页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第61页 |
| ·重组蛋白的的诱导表达及 western 杂交 | 第61-63页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第63-64页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定及抗体制备 | 第64页 |
| ·多克隆抗体的制备及免疫原性检测 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第五章 球孢白僵菌 HsbA 蛋白在菌体及感染虫体的免疫定位分析 | 第66-77页 |
| ·试验材料 | 第66-68页 |
| ·供试菌株 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66-67页 |
| ·主要缓冲液和培养基的配方 | 第67-68页 |
| ·试验方法 | 第68-70页 |
| ·取材和固定 | 第68-69页 |
| ·漂洗、脱水和浸透 | 第69页 |
| ·包埋与聚合 | 第69-70页 |
| ·免疫电镜切片 | 第70页 |
| ·免疫染色及电镜观察 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-76页 |
| ·抗体稀释倍数对免疫电镜观察结果的影响 | 第70-72页 |
| ·正常生长状态下，孢子和菌丝 HsbA 蛋白的免疫电镜观察结果 | 第72-73页 |
| ·侵染状态下，孢子和菌丝 HsbA 蛋白的免疫电镜观察结果 | 第73-74页 |
| ·孢子和菌丝中 HsbA 蛋白在不同状态下的免疫电镜观察结果对比 | 第74页 |
| ·HsbA 蛋白在感染虫体中免疫电镜观察结果 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·免疫电镜技术的关键步骤讨论 | 第76页 |
| ·球孢白僵菌 HsbA 蛋白的免疫电镜观察及定位分析 | 第76-77页 |
| 第六章 球孢白僵菌 HsbA 蛋白的功能分析 | 第77-93页 |
| ·试验材料 | 第77-78页 |
| ·供试菌株 | 第77页 |
| ·主要试剂 | 第77页 |
| ·主要仪器设备 | 第77页 |
| ·主要缓冲液和培养基的配方 | 第77-78页 |
| ·试验方法 | 第78-82页 |
| ·载体构建 | 第78-79页 |
| ·球孢白僵菌的遗传转化 | 第79-80页 |
| ·DNA 提取及转化子的鉴定 | 第80页 |
| ·高温敏感性测定 | 第80页 |
| ·菌丝与孢子产量测定 | 第80-81页 |
| ·气生菌丝的形成及穿透能力检测 | 第81页 |
| ·菌丝与分生孢子疏水能力检测 | 第81页 |
| ·菌丝与分生孢子附着性检测 | 第81-82页 |
| ·对西花蓟马的毒力测定 | 第82页 |
| ·结果与分析 | 第82-91页 |
| ·敲除载体 pUC18-ABGBTCD 的构建 | 第82-83页 |
| ·转化子的筛选及验证 | 第83-85页 |
| ·高温敏感性测定 | 第85页 |
| ·生物量与孢子产量测定 | 第85-86页 |
| ·气生菌丝的形成及穿透 | 第86-88页 |
| ·菌丝与分生孢子疏水能力检测 | 第88-89页 |
| ·菌丝与分生孢子附着能力检测 | 第89-90页 |
| ·对西花蓟马的毒力测定 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| ·敲除载体 pUC18-ABGBTCD 的构建及遗传转化方法的选择 | 第91页 |
| ·HsbA 基因与温度耐受 | 第91-92页 |
| ·HsbA 基因与生长发育 | 第92页 |
| ·HsbA 基因与致病性 | 第92-93页 |
| 第七章 全文结论 | 第93-95页 |
| ·主要结论 | 第93-94页 |
| ·创新点 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 个人简历 | 第113页 |
| 攻读博士期间撰写或发表的文章 | 第113页 |
