| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的研究背景 | 第8-12页 |
| ·胰高血糖素样肽-1（GLP-1）简介 | 第8-9页 |
| ·糖尿病与 GLP-1 | 第9-10页 |
| ·GLP-1 类似物的研究进展 | 第10-12页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第12-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统的应用现状 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母表达系统常用的载体与宿主 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的分离纯化研究 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的粗分离阶段 | 第14页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的精细纯化阶段 | 第14-15页 |
| ·GLP-1 及其类似物的活性评价方法的研究进展 | 第15页 |
| ·GLP-1 及其类似物体外活性的评价方法 | 第15页 |
| ·GLP-1 及其类似物体内活性的评价方法 | 第15页 |
| ·立题意义 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 融合蛋白 GGH 氮端延长类似物的克隆表达 | 第17-30页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌种和质粒 | 第17页 |
| ·培养基和培养条件 | 第17-18页 |
| ·工具酶 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-26页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物基因的扩增与回收 | 第19-20页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物的基因与克隆载体的连接、转化和验证 | 第20-21页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物的基因与表达载体的连接、转化和验证 | 第21-23页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物重组表达载体的转化和重组菌的筛选 | 第23-24页 |
| ·重组菌阳性转化子的筛选和鉴定 | 第24-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-29页 |
| ·重组表达菌株的构建流程 | 第26页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物的基因扩增 | 第26-27页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物克隆载体的构建和验证 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物表达载体的构建和验证 | 第28页 |
| ·重组毕赤酵母表达菌株的筛选与验证结果 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 融合蛋白 GGH 类似物的发酵与分离纯化 | 第30-41页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·缓冲液 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·重组菌株的摇瓶发酵 | 第32页 |
| ·发酵液上清的预处理 | 第32页 |
| ·发酵液上清的超滤浓缩 | 第32-33页 |
| ·Blue Sepharose 6 Fast Flow 层析 | 第33页 |
| ·Phenyl Sepharose 6 Fast Flow 层析 | 第33页 |
| ·Q Sepharose Fast Flow 层析 | 第33-34页 |
| ·凝胶 Superdex G-25 层析 | 第34页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物浓度的测定 | 第34页 |
| ·SDSPAGE 检测蛋白纯度 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·重组菌株的摇瓶发酵 | 第35页 |
| ·发酵液上清的超滤浓缩 | 第35-36页 |
| ·Blue Sepharose 6 Fast Flow 层析 | 第36-37页 |
| ·Phenyl Sepharose 6 Fast Flow 层析 | 第37-38页 |
| ·Q Sepharose Fast Flow 层析 | 第38页 |
| ·凝胶 Superdex G-25 层析 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物的纯化工艺 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 融合蛋白 GGH 类似物的活性评价与筛选 | 第41-49页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·细胞株 | 第41-42页 |
| ·实验动物 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·细胞培养试剂的配制 | 第42-43页 |
| ·细胞培养 | 第43页 |
| ·Bradford 法测蛋白浓度 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物体外活性的测定 | 第44页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物降血糖活性的测定 | 第44-45页 |
| ·A-GGH 的分子量的测定 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白 GGH 类似物的体外活性 | 第46-47页 |
| ·A-GGH 和 G-GGH 降血糖活性结果 | 第47页 |
| ·A-GGH 的分子量测定结果 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49页 |
| 展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 附录 | 第55页 |
