| 第一部分 基于LC-MS/MS技术的超级细菌耐药酶NDM-1的检测及降解抗生素特性研究 | 第1-103页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 缩略语表 | 第17-19页 |
| 第1章 前言 | 第19-22页 |
| 1 抗生素耐药现状 | 第19-20页 |
| 2 细菌耐药酶诊断技术研究现状 | 第20-21页 |
| 3 液质联用技术在蛋白质研究中的应用 | 第21-22页 |
| 4 本课题研究目的和内容 | 第22-23页 |
| 第2章 重组细菌耐药酶的表达纯化 | 第23-37页 |
| 1 实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·试剂和药品 | 第23-24页 |
| ·缓冲液 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-31页 |
| ·NDM-1蛋白的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·细菌菌体收集及超声破碎 | 第27页 |
| ·纯化目的蛋白 | 第27-29页 |
| ·蛋白样品的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·对蛋白胶进行考马斯亮蓝快速染色 | 第30页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
| ·其他重组细菌耐药酶的表达、纯化 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-35页 |
| ·目的蛋白诱导表达及纯化 | 第31-34页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35页 |
| 5 小结 | 第35-37页 |
| 第3章 重组细菌耐药酶的LC-MS/MS检测 | 第37-51页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| ·药品与试剂 | 第37页 |
| ·耗材 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-40页 |
| ·重组蛋白PAGE胶制备 | 第38页 |
| ·蛋白酶解条件的建立 | 第38页 |
| ·LC-MS/MS分析条件 | 第38-40页 |
| ·数据处理 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-48页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第40-44页 |
| ·Mascot检索 | 第44-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| ·蛋白酶解 | 第48-49页 |
| ·LC-MS/MS分析条件 | 第49-50页 |
| ·Mascot检索 | 第50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 第4章 肺炎克雷伯杆菌中NDM-1的LC-MS/MS检测 | 第51-57页 |
| 1 实验材料 | 第51页 |
| ·菌株 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·试剂和药品 | 第51页 |
| ·溶液制备 | 第51页 |
| ·仪器设备 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-52页 |
| ·肺炎克雷伯杆菌ATCC BAA2146的培养 | 第51-52页 |
| ·肺炎克雷伯杆菌ATCC BAA2146裂解液的制备 | 第52页 |
| 2 .3 肺炎克雷伯杆菌ATCC BAA2146裂解液蛋白电泳 | 第52页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第52页 |
| ·蛋白酶解 | 第52页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第52页 |
| ·数据处理 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-56页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
| ·蛋白浓度 | 第53-54页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第54页 |
| ·Mascot检索 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 第5章 基于LC-MS/MS的感染动物血清中NDM-1的检测 | 第57-81页 |
| 1 实验材料 | 第57-58页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·试剂和药品 | 第57-58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-61页 |
| ·肺炎克雷伯杆菌ATCC BAA2146的培养 | 第58页 |
| ·全身感染动物模型的建立 | 第58页 |
| ·感染血清预处理 | 第58-59页 |
| ·血清高丰度蛋白去除 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第59页 |
| ·蛋白酶解 | 第59页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第59-60页 |
| ·实验室三步法验证 | 第60页 |
| ·数据处理 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-79页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第61-62页 |
| ·LC-MS/MS分析结果 | 第62-72页 |
| ·实验室三步法验证 | 第72-79页 |
| 4 讨论 | 第79-80页 |
| 5 小结 | 第80-81页 |
| 第6章 NDM-1对β-内酰胺类抗生素降解特性研究 | 第81-95页 |
| 1 实验材料 | 第81-82页 |
| ·药品与试剂 | 第81页 |
| ·耗材 | 第81页 |
| ·主要仪器 | 第81-82页 |
| 2 实验方法 | 第82-84页 |
| ·LC-MS/MS分析条件 | 第82-83页 |
| ·确定各底物最佳测定波长 | 第83页 |
| ·抗生素对NDM-1的稳定性测试 | 第83页 |
| ·NDM-1的酶动力学 | 第83-84页 |
| 3 结果 | 第84-89页 |
| ·各底物最佳吸收波长 | 第84页 |
| ·抗生素对NDM-1的稳定性试验 | 第84-85页 |
| ·NDM-1的酶动力学特征 | 第85-89页 |
| 4 讨论 | 第89-93页 |
| ·LC-MS/MS分析条件 | 第89-92页 |
| ·抗生素对NDM-1的稳定性 | 第92页 |
| ·NDM-1的酶动力学特性 | 第92-93页 |
| 5 小结 | 第93-95页 |
| 第7章 讨论与结论 | 第95-99页 |
| 1 讨论 | 第95-96页 |
| 2 结论 | 第96-99页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 第二部分 新型抗结核候选物YH-8的临床前药代动力学研究 | 第103-195页 |
| 中文摘要 | 第105-107页 |
| Abstract | 第107-109页 |
| 缩略语表 | 第109-111页 |
| 第1章 前言 | 第111-115页 |
| 1 结核病现状 | 第111-112页 |
| 2 抗结核药物研发现状 | 第112-113页 |
| 3 液-质联用技术及其在药物研究中的应用 | 第113页 |
| 4 本课题研究目的和内容 | 第113-115页 |
| 第2章 生物样品中YH-8的LC-MS/MS分析方法的确立 | 第115-129页 |
| 1 实验材料 | 第115-116页 |
| ·药品与试剂 | 第115页 |
| ·实验动物 | 第115页 |
| ·耗材 | 第115-116页 |
| ·主要仪器 | 第116页 |
| 2 生物样品预处理 | 第116-117页 |
| ·溶液的配制 | 第116页 |
| ·生物样品的预处理 | 第116-117页 |
| 3 LC-MS/MS分析条件 | 第117页 |
| ·色谱条件 | 第117页 |
| ·质谱条件 | 第117页 |
| 4 分析方法确证 | 第117-120页 |
| ·特异性 | 第118页 |
| ·标准曲线及线性范围 | 第118页 |
| ·灵敏度 | 第118-119页 |
| ·精密度和准确性 | 第119页 |
| ·提取回收率 | 第119页 |
| ·基质效应 | 第119-120页 |
| ·稳定性 | 第120页 |
| 5 分析方法的实施 | 第120页 |
| 6 结果 | 第120-125页 |
| ·特异性 | 第121-122页 |
| ·标准曲线、线性范围和灵敏度 | 第122页 |
| ·精密度和准确性 | 第122-123页 |
| ·提取回收率和基质效应 | 第123-124页 |
| ·稳定性 | 第124-125页 |
| 7 讨论 | 第125-127页 |
| ·样品的前处理 | 第125-126页 |
| ·色谱条件 | 第126页 |
| ·质谱条件 | 第126-127页 |
| 8 小结 | 第127-129页 |
| 第3章 YH-8在大鼠体内的药代动力学研究 | 第129-143页 |
| 1 实验材料 | 第129页 |
| 2 实验方法 | 第129-130页 |
| ·YH-8药液的配制 | 第129页 |
| ·动物饲养及给药 | 第129页 |
| ·血样采集 | 第129页 |
| ·样品处理与分析 | 第129-130页 |
| 3 结果 | 第130-140页 |
| ·血药浓度 | 第130-132页 |
| ·药时曲线 | 第132-136页 |
| ·药代动力学参数 | 第136-140页 |
| 4 讨论 | 第140-141页 |
| ·给药剂量 | 第140页 |
| ·药物动力学 | 第140-141页 |
| 5 小结 | 第141-143页 |
| 第4章 YH-8在大鼠体内的组织分布研究 | 第143-159页 |
| 1 实验材料 | 第143页 |
| 2 实验方法 | 第143-144页 |
| ·YH-8药液的配制 | 第143页 |
| ·动物饲养及给药 | 第143页 |
| ·大鼠给药方案和药品采集 | 第143-144页 |
| ·样品处理与分析 | 第144页 |
| 3 结果 | 第144-156页 |
| ·色谱行为 | 第144-148页 |
| ·大鼠的组织样品标准曲线绘制 | 第148-153页 |
| ·组织药物浓度 | 第153-156页 |
| 4 讨论 | 第156-157页 |
| ·检测方法适用性 | 第156-157页 |
| ·药物的组织分布 | 第157页 |
| 5 小结 | 第157-159页 |
| 第5章 YH-8的生物转化研究 | 第159-179页 |
| 1 实验材料 | 第159-160页 |
| ·药品与试剂 | 第159页 |
| ·混合人肝微粒体和cDNA重组表达的人源P450微粒体 | 第159页 |
| ·实验动物 | 第159页 |
| ·耗材 | 第159-160页 |
| ·主要仪器 | 第160页 |
| 2 实验方法 | 第160-164页 |
| ·肝脏体外代谢 | 第160-163页 |
| ·动物实验 | 第163-164页 |
| ·LC-MS/MS分析条件 | 第164页 |
| 3 结果 | 第164-174页 |
| ·肝脏体外代谢结果 | 第164-173页 |
| ·大鼠体内实验结果 | 第173-174页 |
| 4 讨论 | 第174-177页 |
| ·人肝微粒体体系 | 第175页 |
| ·代谢酶亚型确定 | 第175-176页 |
| ·代谢产物鉴定 | 第176-177页 |
| ·基本代谢途径 | 第177页 |
| 5 小结 | 第177-179页 |
| 第6章 YH-8代谢酶抑制研究 | 第179-185页 |
| 1 实验材料 | 第179-180页 |
| ·药品与试剂 | 第179页 |
| ·耗材 | 第179页 |
| ·仪器 | 第179-180页 |
| ·溶液的配制 | 第180页 |
| 2 实验方法 | 第180-182页 |
| ·CYP3A4的酶抑制研究 | 第180-181页 |
| ·CYP2C9的酶抑制研究 | 第181-182页 |
| ·CYP2C19的酶抑制研究 | 第182页 |
| ·CYP2D6的酶抑制研究 | 第182页 |
| ·CYP1A2的酶活性研究 | 第182页 |
| ·数据处理 | 第182页 |
| 3 结果 | 第182-183页 |
| 4 讨论 | 第183-184页 |
| ·CYP450重组酶亚型的选择 | 第183-184页 |
| ·孵育体系 | 第184页 |
| ·YH-8的酶抑制评价 | 第184页 |
| 5 小结 | 第184-185页 |
| 第7章 讨论与结论 | 第185-189页 |
| 1 讨论 | 第185-186页 |
| 2 结论 | 第186-189页 |
| 参考文献 | 第189-195页 |
| 总结与展望 | 第195-197页 |
| 文献综述 | 第197-211页 |
| 参考文献 | 第205-211页 |
| 个人简历、在校期间发表的学术文章 | 第211-213页 |
| 致谢 | 第213-215页 |
