| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1. ESC 定向诱导神经细胞的方法 | 第10-13页 |
| ·拟胚体培养法(EB culture method) | 第11-12页 |
| ·共培养法(coculture method) | 第12页 |
| ·单层培养法(monoculture method) | 第12-13页 |
| 2. ESC 定向分化为神经细胞模型用于神经毒理的评价 | 第13-14页 |
| 3. 神经特异性标记物的研究现状 | 第14-16页 |
| ·巢蛋白(Nestin) | 第14页 |
| ·成对盒蛋白 6 (Paired box protein 6, Pax-6) | 第14-15页 |
| ·微管相关蛋白(Microtubule-associated protein, MAP) | 第15页 |
| ·微管蛋白(Tubulin) | 第15页 |
| ·神经丝蛋白(Neurofilament protein, NF) | 第15页 |
| ·胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein, GFAP) | 第15-16页 |
| 4. bFGF 的生物学活性 | 第16-17页 |
| ·bFGF 广泛的生物学活性 | 第16页 |
| ·bFGF 神经诱导作用的研究进展 | 第16-17页 |
| 5. 研究目的及技术路线 | 第17-20页 |
| ·立体依据 | 第17-18页 |
| ·拟研究内容 | 第18-19页 |
| ·技术路线图 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-31页 |
| 1. 实验仪器和材料 | 第20-25页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·细胞系 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要试验溶液的配制 | 第22-25页 |
| 2. 实验方法 | 第25-31页 |
| ·小鼠胚胎干细胞培养、鉴定和分化 | 第25-26页 |
| ·细胞免疫荧光染色分析 | 第26-27页 |
| ·CCK8 测定 bFGF 和 VPA 的细胞毒性（IC50） | 第27页 |
| ·神经细胞特异性基因表达分析 | 第27-29页 |
| ·细胞总蛋白的制备和免疫印迹 | 第29-30页 |
| ·碘化丙啶（propidium iodide）检测细胞凋亡 | 第30页 |
| ·Hoechst 33342 检测细胞凋亡 | 第30页 |
| ·细胞培养液中氧化应激蛋白的测定 | 第30页 |
| ·数据统计 | 第30-31页 |
| 第三章 实验结果 | 第31-48页 |
| 1 胚胎干细胞定向分化为神经细胞模型的建立 | 第31-38页 |
| ·ESC 未分化的鉴定 | 第31-32页 |
| ·神经诱导分化程序及结果 | 第32-33页 |
| ·RA 最佳诱导浓度的确定 | 第33-34页 |
| ·免疫荧光检测神经前体细胞特异性标记蛋白 | 第34-35页 |
| ·免疫荧光检测神经元细胞特异性标记蛋白 | 第35页 |
| ·RT-PCR 测定分化各个时期特异性标记基因 | 第35-36页 |
| ·Q-PCR 检测未分化特异性标记基因的表达 | 第36-38页 |
| 2 不同浓度的 bFGF 对神经诱导过程的影响 | 第38-41页 |
| ·形态学观察不同浓度的 bFGF 对神经诱导过程的影响 | 第38-39页 |
| ·bFGF 对 ESC 来源神经细胞的毒性作用（IC50） | 第39页 |
| ·bFGF 对 ESC 分化为神经细胞过程中冠状结构的影响 | 第39-40页 |
| ·验证神经细胞定向分化模型用于评价待测物神经发育毒性的有效性 | 第40-41页 |
| 3 不同浓度 bFGF 对胚胎干细胞来源的神经细胞的特异性标记基因和蛋白的影响 | 第41-44页 |
| ·bFGF 对神经细胞特异性标记基因表达的影响 | 第41-44页 |
| ·bFGF 对神经细胞特异性标记蛋白表达的影响 | 第44页 |
| 4 bFGF 对神经细胞分化过程中抑制凋亡和氧化应激作用 | 第44-48页 |
| ·bFGF 对神经细胞分化过程中细胞凋亡率的影响 | 第44-46页 |
| ·bFGF 对神经细胞分化过程中细胞凋亡的形态学观察 | 第46页 |
| ·不同浓度 bFGF 对神经分化细胞培养基中氧化应激水平的影响 | 第46-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-53页 |
| ·胚胎干细胞定向分化神经细胞模型的建立及 bFGF 的作用 | 第48-49页 |
| ·VPA 用于验证神经诱导分化模型的有效性 | 第49页 |
| ·bFGF 胚胎干细胞来源神经细胞的扩增、分化的影响 | 第49-51页 |
| ·毒性相关神经特异性标记物的筛选 | 第51页 |
| ·bFGF 胚胎毒性与神经毒性作用的关系 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 英文缩略词表 | 第64-65页 |
| 攻硕期间发表论文 | 第65-66页 |
| bFGF 原液检验报告单 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
