| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一章：基于LC/MS的糖蛋白N-糖基化修饰糖链分析方法的初步研究 | 第16-35页 |
| 一、材料与方法 | 第17-21页 |
| 1. 材料 | 第17-18页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| 2. 方法 | 第18-21页 |
| ·糖蛋白中N-糖链的释放 | 第18-19页 |
| ·提取回收糖链 | 第19页 |
| ·糖链的荧光标记 | 第19-20页 |
| ·去除过量标记试剂 | 第20页 |
| ·LC/MS分析 | 第20-21页 |
| 二、结果与分析 | 第21-35页 |
| 1. TNFR-Fc融合蛋白N-糖链纯化条件的优化 | 第21-25页 |
| ·PNGase F酶切释放融合蛋白N-糖链 | 第21-22页 |
| ·融合蛋白N-糖链的提取回收 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白N-糖链的柱前衍生化 | 第23-24页 |
| ·除去过量衍生化试剂 | 第24-25页 |
| 2. 糖蛋白N-糖基化修饰糖链的LC/MS分析 | 第25-35页 |
| ·RNaseB的N-糖链LC/MS分析方法的建立 | 第25-29页 |
| ·TNFR-Fc融合蛋白标准品的N-糖链LC/MS分析 | 第29-35页 |
| 第二章：不同TNFR-Fc融合蛋白N-糖基化修饰糖链的LC/MS分析 | 第35-52页 |
| 一、材料与方法 | 第35-41页 |
| 1. 材料 | 第35-37页 |
| ·仪器设备 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·实验相关培养基配方 | 第37页 |
| 2. 方法 | 第37-41页 |
| ·酵母表达重组TNFR-Fc融合蛋白的制备 | 第37-38页 |
| ·不同TNFR-Fc融合蛋白中N-糖链的释放 | 第38-39页 |
| ·提取回收糖链 | 第39页 |
| ·糖链的荧光标记 | 第39页 |
| ·去除过量标记试剂 | 第39-40页 |
| ·LC/MS分析 | 第40-41页 |
| 二、结果与分析 | 第41-52页 |
| 1. 毕赤酵母表达的TNFR-Fc融合蛋白N-糖链LC/MS分析 | 第41-46页 |
| 2. TNFR-Fc融合蛋白的N-糖基的比较 | 第46-49页 |
| 3. TNFR-Fc融合蛋白去唾液酸后N-糖基的比较 | 第49-52页 |
| 第三章：不同TNFR-Fc融合蛋白的生物学活性测定 | 第52-61页 |
| 一、材料与方法 | 第52-57页 |
| 1. 材料 | 第52-54页 |
| ·仪器设备 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·细胞株 | 第53页 |
| ·细胞培养相关试剂配方 | 第53-54页 |
| 2. 方法 | 第54-57页 |
| ·细胞培养 | 第54-55页 |
| ·细胞种板 | 第55页 |
| ·新鲜培养液E配制 | 第55页 |
| ·TNFR-Fc工作标准品稀释 | 第55-56页 |
| ·TNFR-Fc样品稀释 | 第56-57页 |
| ·TNFR-Fc蛋白中和TNF-α的测定 | 第57页 |
| 二、结果与分析 | 第57-61页 |
| 1. 应用Origin7.5软件进行四参数分析 | 第57-60页 |
| 2. 不同TNFR-Fc融合蛋白比活性的比较 | 第60-61页 |
| 第四章：讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 综述 | 第67-77页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 附录 中英文缩略词表 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81页 |
