| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| CONTENTS | 第12-15页 |
| 图表目录 | 第15-18页 |
| 1 绪论 | 第18-43页 |
| ·燃料乙醇产业 | 第18-21页 |
| ·清洁能源燃料乙醇 | 第18页 |
| ·燃料乙醇发展现状 | 第18-21页 |
| ·絮凝酵母的絮凝机理与育种 | 第21-27页 |
| ·酵母絮凝性概述 | 第21-23页 |
| ·絮凝影响因素 | 第23-25页 |
| ·絮凝的遗传学研究 | 第25-27页 |
| ·絮凝酵母的构建 | 第27页 |
| ·酵母乙醇耐性研究 | 第27-40页 |
| ·提高酿酒酵母乙醇耐受性的意义 | 第27-28页 |
| ·酿酒酵母对乙醇响应的机制 | 第28-36页 |
| ·提高酿酒酵母乙醇耐受性的手段 | 第36-40页 |
| ·本研究工作的目的意义和内容 | 第40-43页 |
| 2 新型絮凝工业酵母菌株构建 | 第43-71页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料与方法 | 第43-55页 |
| ·菌种和质粒 | 第43页 |
| ·引物 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·大肠杆菌培养与质粒提取方法 | 第47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备与转化 | 第47-48页 |
| ·酵母基因组提取方法 | 第48页 |
| ·基因和启动子的克隆 | 第48-50页 |
| ·表达载体构建与线性化 | 第50-51页 |
| ·酵母转化与遗传稳定性验证 | 第51-52页 |
| ·酵母菌絮凝性状的定性与定量表征及糖抑制类型检测 | 第52-53页 |
| ·发酵实验与产物分析 | 第53-54页 |
| ·诱导絮凝菌株的诱导条件验证 | 第54页 |
| ·实时定量PCR检测乙醇诱导条件下FLO1SPSC01基因表达量 | 第54-55页 |
| ·RT-PCR检测生长条件下SPSC01中各絮凝基因表达 | 第55页 |
| ·实验结果与讨论 | 第55-70页 |
| ·基因克隆与分析 | 第55-58页 |
| ·絮凝酵母菌株构建 | 第58-62页 |
| ·絮凝表型的定性与定量分析 | 第62-66页 |
| ·乙醇诱导絮凝菌株絮凝特性的验证 | 第66-67页 |
| ·发酵实验 | 第67-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 3 絮凝诱导调控的优化与絮凝基因多样性研究 | 第71-84页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·实验材料与方法 | 第71-75页 |
| ·菌种 | 第71页 |
| ·引物 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第71页 |
| ·菌种构建 | 第71-74页 |
| ·转化子絮凝性状及絮凝基因表达量测定 | 第74页 |
| ·诱导絮凝的验证 | 第74-75页 |
| ·发酵实验 | 第75页 |
| ·絮凝基因多样性验证 | 第75页 |
| ·实验结果与讨论 | 第75-83页 |
| ·启动子克隆 | 第75-76页 |
| ·絮凝酵母构建 | 第76-78页 |
| ·絮凝表型的比较 | 第78-80页 |
| ·发酵实验 | 第80-81页 |
| ·絮凝基因的多样性 | 第81-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 4 锌离子添加下自絮凝酵母SPSC01连续乙醇发酵和组学研究 | 第84-121页 |
| ·引言 | 第84-85页 |
| ·实验材料与仪器 | 第85页 |
| ·菌种 | 第85页 |
| ·培养基 | 第85页 |
| ·引物 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-91页 |
| ·发酵实验 | 第85页 |
| ·主要仪器设备 | 第85-86页 |
| ·分析方法 | 第86-88页 |
| ·酵母菌形态观察 | 第88页 |
| ·总RNA提取 | 第88页 |
| ·转录组分析流程 | 第88页 |
| ·实时定量PCR验证转录组分析结果 | 第88页 |
| ·总蛋白提取 | 第88-89页 |
| ·蛋白组分析 | 第89页 |
| ·紫外诱变 | 第89-90页 |
| ·介质阻挡等离子体诱变 | 第90页 |
| ·人工转录因子文库筛选 | 第90页 |
| ·乙醇耐性提高菌株的筛选 | 第90-91页 |
| ·耐受提高菌株遗传稳定性验证 | 第91页 |
| ·实验结果与讨论 | 第91-119页 |
| ·添加锌离子对SPSC01连续发酵实验的影响 | 第91-93页 |
| ·添加锌离子对SPSC01细胞胁迫耐受性的影响 | 第93页 |
| ·添加锌离子对SPSC01胞内物质组成的的影响 | 第93-95页 |
| ·锌离子添加对菌体絮凝表型的影响 | 第95页 |
| ·添加锌离子对胞内活性氧(ROS)的影响 | 第95-96页 |
| ·醇胁迫条件下细胞形态变化 | 第96-97页 |
| ·总RNA和总蛋白提取和质量检测 | 第97-98页 |
| ·转录组和蛋白组分析基本信息及关联分析 | 第98-100页 |
| ·Real-time PCR验证转录组信息 | 第100页 |
| ·关键基因及代谢途径分析 | 第100-114页 |
| ·筛选乙醇耐受性提高的工业酿酒酵母菌株 | 第114-119页 |
| ·小结 | 第119-121页 |
| 5 结论与展望 | 第121-123页 |
| ·结论 | 第121页 |
| ·创新点 | 第121-122页 |
| ·展望 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-138页 |
| 附录A 转录组检测到的94个功能未知的基因及表达水平差异 | 第138-140页 |
| 附录B 部分转录组差异表达基因及功能注释 | 第140-143页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 作者简介 | 第146-147页 |
