| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 骨骼肌发育过程概述 | 第12-14页 |
| ·骨骼肌的胚胎起源 | 第12-13页 |
| ·骨骼肌的发生过程 | 第13-14页 |
| 2 MRFS家族概况 | 第14-16页 |
| 3 MYoG基因研究进展 | 第16-20页 |
| ·MyoG基因的结构 | 第17页 |
| ·MyoG基因的生物学功能 | 第17-19页 |
| ·MyoG的表达模式 | 第19-20页 |
| ·MyoG表达的调节 | 第20页 |
| 4 精原干细胞介导转基因研究进展 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-26页 |
| 第二章 羊MYOG基因的克隆及序列分析 | 第26-36页 |
| 1 材料与方法 | 第26-29页 |
| ·血样、菌种 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·湖羊基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·MyoG基因三个外显子的扩增 | 第27页 |
| ·MyoG外显子2、3的拼接 | 第27-28页 |
| ·MyoG全长CDS的扩增 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·MyoG基因的T-A克隆 | 第29页 |
| ·MyoG基因序列同源性分析 | 第29页 |
| ·MyoG蛋自的结构域分析 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-32页 |
| ·MyoG基因三个外显子的扩增与拼接 | 第29-30页 |
| ·MyoG全长CDS的扩增 | 第30-31页 |
| ·MyoG基因的T-A克隆 | 第31页 |
| ·测序结果 | 第31页 |
| ·MyoG基因序列同源性分析 | 第31-32页 |
| ·MyoG蛋白结构域分析 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 4 结论 | 第34页 |
| 参考文献 | 第34-36页 |
| 第三章 重组MYOG的表达及其亚细胞定位的研究 | 第36-45页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·菌种、质粒与细胞株 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·引物的设计与合成 | 第37页 |
| ·目的基因的PCR扩增及产物的纯化 | 第37页 |
| ·重组质粒pEGFP-C1-MyoG的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·MyoG蛋白亚细胞定位预测 | 第38页 |
| ·转染用细胞的制备 | 第38页 |
| ·重组质粒pEGFP-C1-MyoG转染细胞 | 第38页 |
| ·RT-PCR检测融合蛋白在NIH-3T3中的表达 | 第38页 |
| ·Western Blot检测融合蛋白在NIH-3T3中的表达 | 第38-39页 |
| 2 结果 | 第39-42页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·pEGFP-C1-MyoG融合蛋白表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·MyoG蛋白亚细胞定位预测 | 第40页 |
| ·融合蛋白在细胞中的定位 | 第40页 |
| ·RT-PCR检测MyoG的表达 | 第40-42页 |
| ·Western Blot检测融合蛋白的表达 | 第42页 |
| 3. 讨论 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 第四章 MYOG成肌活性研究 | 第45-55页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| ·菌种、质粒 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·引物的设计与合成 | 第45-46页 |
| ·目的基因的PCR扩增及产物的纯化 | 第46页 |
| ·重组质粒pcDNA3.0-MyoG的构建及鉴定 | 第46页 |
| ·转染用细胞的制备 | 第46页 |
| ·G418对GEF细胞最小致死量的测定 | 第46页 |
| ·GEF细胞转染条件的优化 | 第46-47页 |
| ·pcDNA3.0-MyoG质粒的稳定转染 | 第47页 |
| ·IFA检测转染细胞 | 第47-48页 |
| ·转染细胞形态学观察 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-51页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第48页 |
| ·重组质粒pcDNA3.0-MyoG的构建 | 第48-49页 |
| ·转染用细胞GEF的制备 | 第49-50页 |
| ·G418对GEF最小致死浓度的确定 | 第50页 |
| ·GEF最佳转染条件的优化 | 第50页 |
| ·稳定整合MyoG基因细胞的获得 | 第50-51页 |
| ·IFA检测Desmin的表达 | 第51页 |
| ·转染细胞形态学观察 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第五章 精原干细胞体内介导生产转基因羊 | 第55-63页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·质粒与实验用羊 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·注射用质粒的准备 | 第55页 |
| ·转染液的配制 | 第55-56页 |
| ·睾丸内注射pEGFP-C1-MyoG质粒 | 第56页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA PCR检测 | 第56-57页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA点杂交检测 | 第57页 |
| ·F_1代羔羊组织蛋白Western Blot检测 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-60页 |
| ·pEGFP-C1-MyoG质粒线性化酶切 | 第57页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA PCR检测 | 第57-59页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA点杂交检测 | 第59页 |
| ·Western Blot检测融合基因在F_1代中的表达 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 4 结论 | 第62页 |
| 参考文献 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第64-65页 |
