| 第一部分 | 第1-53页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 材料和方法 | 第10-38页 |
| 1. 实验材料 | 第10-19页 |
| ·细菌和细胞 | 第10页 |
| ·细菌菌株 | 第10页 |
| ·细胞株 | 第10页 |
| ·质粒载体 | 第10-14页 |
| ·动物 | 第14页 |
| ·实验用工具酶以及DNA,蛋白maker | 第14-15页 |
| ·试剂盒 | 第15页 |
| ·化学试剂(按试剂公司分类) | 第15-16页 |
| ·主要仪器及设备 | 第16页 |
| ·分析软件 | 第16-17页 |
| ·实验所用引物 | 第17-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-37页 |
| ·质粒载体的构建 | 第19-23页 |
| ·PCR法扩增目的片段(Foxp1基因分成两段做PCR) | 第19-20页 |
| ·测序正确后将Foxp1前后两段的序列进行搭桥PCR | 第20页 |
| ·DNA及载体的酶切 | 第20-21页 |
| ·DNA琼脂糖凝皎电泳 | 第21页 |
| ·片段与载体的连接 | 第21-22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第22-23页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第23页 |
| ·细胞培养实验 | 第23-26页 |
| ·细胞的培养条件 | 第23-24页 |
| ·细胞的常规实验 | 第24页 |
| ·细胞计数与存活测试 | 第24页 |
| ·肝原代细胞的分离以及培养 | 第24-26页 |
| ·转染实验 | 第26页 |
| ·重组腺病毒的构建与包装 | 第26-29页 |
| ·制备电转化用E.coli BJ5183感受态细胞 | 第26-27页 |
| ·穿梭质粒pAdTrack-CMV-Foxp1线性化 | 第27页 |
| ·回收酶切片段 | 第27-28页 |
| ·线性化的AdTrack-CMV-Foxp1电转化BJ5183(不保存菌种) | 第28页 |
| ·筛选同源重组pAd-Foxp1 | 第28页 |
| ·线性化pAd-Foxp1转染293A细胞包装腺病毒 | 第28-29页 |
| ·准备病毒裂解液 | 第29页 |
| ·感染293A扩增腺病毒 | 第29页 |
| ·腺病毒感染细胞 | 第29-30页 |
| ·DNA、RNA提取cDNA的合成 | 第30-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第30页 |
| ·总DNA和蛋白质的分离提取 | 第30-31页 |
| ·总RNA逆转录合成cDNA | 第31-32页 |
| ·WESTERN BLOT | 第32-34页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE电泳步骤 | 第32-33页 |
| ·转膜 | 第33页 |
| ·Western印迹杂交 | 第33-34页 |
| ·Real-Time PCR实验 | 第34-35页 |
| ·dual luciferase reporter assay system实验 | 第35页 |
| ·测定葡萄糖浓度-氧化酶法 | 第35-36页 |
| ·GTT实验 | 第36-37页 |
| 3. 实验流程 | 第37-38页 |
| 实验结果 | 第38-45页 |
| 1. 禁食-重新喂食,DB/DB,OB/OB基因芯片分析FOXP1表达情况 | 第38-39页 |
| 2. FOXP1对糖异生相关基因PEPCK、G6PC和PGC1A启动子有抑制作用 | 第39-41页 |
| 3. FOXP1腺病毒的包装 | 第41页 |
| 4. 过表达FOXP1对糖异生和糖酵解相关基因表达的影响 | 第41-43页 |
| 5. 过表达FOXP1能够降低肝原代细胞的葡萄糖输出 | 第43页 |
| 6. 过表达FOXP1能够增加肝脏原代细胞对胰岛素的敏感性 | 第43-44页 |
| 7 过表达FOXP1能够增加高脂饮食诱导肥胖小鼠葡萄糖耐受性 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-48页 |
| 1. FOXP1功能的研究加深了对糖异生和糖酵解关键过程的了解 | 第46-47页 |
| 2. FOXP1具有调节机体糖代谢的生理功能 | 第47-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 第二部分 | 第53-63页 |
| 摘要 | 第53-54页 |
| ABSTRACT | 第54-55页 |
| 前言 | 第55-56页 |
| 材料与方法见第一部分 | 第56页 |
| 实验结果 | 第56-59页 |
| 1.CTGF基因的克隆，CTGFF过表达质粒的构建及重组质粒的构建及鉴定 | 第56页 |
| 2 CTGF基因过表达腺病毒的包装及肝原代水平验证其表达 | 第56-57页 |
| 3 不同禁食条件下CTGF的表达量变化情况 | 第57-59页 |
| 讨论 | 第59-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 综述 | 第65-76页 |
| References | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77-78页 |
