| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-20页 |
| ·人工金属酶 | 第9页 |
| ·配位体选择抗体 | 第9-11页 |
| ·噬菌体展示 | 第11-15页 |
| ·丝状噬菌体 | 第11页 |
| ·M13噬菌体 | 第11-12页 |
| ·噬菌体展示系统 | 第12-13页 |
| ·噬菌体展示的抗体片断 | 第13-15页 |
| ·免疫球蛋白的结构 | 第13-14页 |
| ·抗体形式 | 第14-15页 |
| ·抗体文库 | 第15页 |
| ·单克隆抗体的表达 | 第15-19页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第16-17页 |
| ·在大肠杆菌中表达单克隆抗体 | 第17-18页 |
| ·可溶解表达 | 第18页 |
| ·合成正确折叠的单克隆抗体片断 | 第18-19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第2章 研究材料与方法 | 第20-30页 |
| ·主要实验材料 | 第20-23页 |
| ·实验材料与试剂 | 第20-21页 |
| ·主要实验仪器 | 第21页 |
| ·试剂配制 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-30页 |
| ·目的基因克隆 | 第23-26页 |
| ·PCR片段的扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第24页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·DNA的消化 | 第24-25页 |
| ·连接和感受态细胞的转化 | 第25页 |
| ·阳性克隆的选择 | 第25-26页 |
| ·测序 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26页 |
| ·蛋白质表达及提取 | 第26-29页 |
| ·表达试验 | 第26-27页 |
| ·大量表达试验 | 第27页 |
| ·蛋白的提纯 | 第27页 |
| ·IMAC提纯 | 第27-28页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28页 |
| ·测定蛋白质的浓度 | 第28页 |
| ·Xa因子消化 | 第28页 |
| ·ELISA | 第28-29页 |
| ·展示在噬菌体表面的单克隆抗体的筛选 | 第29页 |
| ·噬菌体颗粒的准备 | 第29-30页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第30-43页 |
| ·实验结果 | 第30-40页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第30页 |
| ·抗体片段的测序 | 第30-31页 |
| ·抗体结合的相互作用 | 第31-32页 |
| ·CDR区域的氨基酸分类 | 第31页 |
| ·抗体片段的三维模型 | 第31-32页 |
| ·活性单链抗体片段的生成 | 第32-40页 |
| ·F11-构建 | 第32-33页 |
| ·IF2(Ⅰ-Ⅲ)-F11的构建 | 第33-35页 |
| ·IF2(Ⅰ-Ⅲ)-F11的克隆 | 第33页 |
| ·IF2(Ⅰ-Ⅲ)-F11表达和提纯 | 第33-34页 |
| ·结合活性试验 | 第34-35页 |
| ·IF2(Ⅰ)-F12-pⅢ(Ⅰ)构建 | 第35-37页 |
| ·IF2(Ⅰ)-F11-PⅢ(Ⅰ)的克隆 | 第35页 |
| ·IF2(Ⅰ)-F11-pⅢ(Ⅰ)表达和提纯 | 第35-37页 |
| ·结合活性试验 | 第37页 |
| ·IF2(Ⅰ)-scFv的构建 | 第37-40页 |
| ·克隆IF2(Ⅰ)-scFv | 第37-38页 |
| ·表达提纯重折叠 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| 第4章 结果 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录 | 第49-65页 |
| 附录1:PCR,筛选和测序所用的核苷酸 | 第49-50页 |
| 附录2:pET-15b 质粒图谱 | 第50-51页 |
| 附录3:pET-24d 质粒图谱 | 第51-52页 |
| 附录4:抗原 | 第52-53页 |
| 附录5:Alignment of scFv DNA Sequences: | 第53-60页 |
| 附录6:F11-Construct Sequence: | 第60-61页 |
| 附录7:IF2(Ⅰ-Ⅲ),-F11-Construct Sequence: | 第61-63页 |
| 附录8:IF2(Ⅰ)-F11-pⅢ(Ⅰ)/IF2(Ⅰ)-F11-Construct Sequence: | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
