| 英文缩略词表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-11页 |
| 英文摘要 | 第11-16页 |
| 1.前言 | 第16-19页 |
| 2.材料和方法 | 第19-46页 |
| ·实验材料 | 第19-25页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·质粒、菌株及细胞株 | 第20页 |
| ·部分试剂的配制 | 第20-24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-46页 |
| ·构建pEGFP-C1-MME重组质粒 | 第25-30页 |
| ·感受态E.coli DH5 α的制备 | 第25页 |
| ·pcDNA3.1-MME质粒转化感受态E.coli DH5 α | 第25-26页 |
| ·阳性克隆(pcDNA3.1-MME/DH5 α)质粒提取 | 第26-27页 |
| ·pcDNA3.1-MME和pEGFP-C1荧光表达载体的双酶切反应 | 第27页 |
| ·目的片段和表达载体琼脂糖凝胶回收 | 第27-28页 |
| ·pcDNA3.1-MME和pEGFP-C1荧光表达载体连接 | 第28页 |
| ·阳性克隆(pEGFP-C1-MME/DH5 α)重组质粒提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pEGFP-C1-MME的鉴定 | 第29-30页 |
| ·小鼠CT-26结肠癌细胞的培养 | 第30页 |
| ·MME真核表达载体稳定转染CT-26结肠癌细胞 | 第30-31页 |
| ·确定G41B筛选浓度 | 第30页 |
| ·脂质体法转染CT-26细胞 | 第30-31页 |
| ·目的基因在稳定转染CT-26细胞中表达的鉴定 | 第31-36页 |
| ·RT-PCR | 第31-34页 |
| ·免疫细胞化学染色(S-P)法 | 第34-35页 |
| ·Western blot分析 | 第35-36页 |
| ·重组MME蛋白的酶活性鉴定 | 第36-38页 |
| ·体外分解Ⅰ型胶原蛋白试验 | 第36-37页 |
| ·明胶酶谱分析(Gelatin zymography) | 第37-38页 |
| ·体外实验 | 第38-40页 |
| ·MTT实验 | 第38-39页 |
| ·重组MME体外分解纤溶酶原实验 | 第39页 |
| ·血管抑素活性鉴定 | 第39页 |
| ·诱导内皮细胞迁移实验(migration assay) | 第39-40页 |
| ·制备放射性碘标纤溶酶原 | 第40-41页 |
| ·使用氯胺T法标记纤溶酶原 | 第40页 |
| ·标记后的纤溶酶原其生物学活性鉴定 | 第40-41页 |
| ·体内实验 | 第41-46页 |
| ·BALB/C小鼠皮下种植瘤模型的建立 | 第41页 |
| ·肿瘤大小与转移的测定 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE电泳和γ射线计数分析 | 第41-42页 |
| ·免疫组织化学(IHC)染色(S-P法) | 第42-43页 |
| ·免疫荧光染色法 | 第43页 |
| ·结肠癌组织中血管抑素和bFGF表达的Western blot分析 | 第43-44页 |
| ·real-time RT PCR | 第44-46页 |
| ·统计分析 | 第46页 |
| 3.结果 | 第46-68页 |
| 第一部分 重组MME质粒的构建、转染和鉴定 | 第46-53页 |
| ·pEGFP-C1-MME真核表达载体的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组MME核苷酸序列测定 | 第47页 |
| ·稳定转染CT-26小鼠结肠癌细胞株的筛选 | 第47-48页 |
| ·稳转重组MME质粒在小鼠CT-26结肠癌细胞中的表达 | 第48-49页 |
| ·重组MME转染对CT-26细胞生长的影响 | 第49-50页 |
| ·目的基因在稳定转染细胞株中表达的鉴定 | 第50-52页 |
| ·重组MME蛋白的酶活性鉴定 | 第52-53页 |
| 第二部分 重组MME对结肠肿瘸生长转移及肿瘤血管生成的影响 | 第53-63页 |
| ·MME对荷瘤小鼠生存时间的影响 | 第53-54页 |
| ·重组MME对小鼠结肠癌生长和转移的影响 | 第54-56页 |
| ·重组MME在小置结肠肿瘤组织中的表达情况 | 第56-57页 |
| ·MME对小鼠结肠肿瘤血管生成的影响 | 第57-63页 |
| 第三部分 重组MME产生血管抑素的作用途径研究 | 第63-68页 |
| ·标记后的纤溶酶原的技术指标和活性情况 | 第63页 |
| ·重组MME分解纤溶酶原体外实验及~(125)1-纤溶酶原活性鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组MME降解纤溶酶原产物抑制内皮细胞增殖 | 第64-65页 |
| ·重组MME降解纤溶酶原产物对内皮细胞的迁移影响 | 第65-66页 |
| ·MME在体内分解纤溶酶原生成血管抑素 | 第66-68页 |
| 4.讨论 | 第68-78页 |
| 第一部分 构建、转染和鉴定pEGFP-C1-MME质粒 | 第69-70页 |
| ·pEGFP-C1-MME的构建和鉴定 | 第69页 |
| ·pEGFP-C1-MME质粒在CT-26细胞中的表达 | 第69-70页 |
| 第二部分 重组MME降解纤溶酶原产生血管抑素 | 第70-74页 |
| ·MME体外降解纤溶酶原生成血管抑素并抑制内皮细胞增值和迁移 | 第70-72页 |
| ·MME体内降解纤溶酶原生成血管抑素 | 第72-74页 |
| 第三部分 重组MME抑制结肠肿瘤生长转移及血管生成 | 第74-78页 |
| ·重组MME抑制小鼠结肠癌皮下种植癌生长转移 | 第74-75页 |
| ·重组MME抑制肿瘤血管生成 | 第75-78页 |
| 5.结论 | 第78页 |
| 6.创新之处 | 第78-79页 |
| 7.目前存在的问题及下一步计划 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附录 个人简历 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 综述 | 第91-113页 |
| 参考文献 | 第105-113页 |
