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甜味蛋白Brazzein酵母表达系统的建立

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第一章 引言第8-27页
   ·甜味蛋白的研究进展第8-21页
     ·甜味蛋白概述第8-9页
     ·甜味蛋白的种类与特点第9-10页
     ·甜味蛋白的结构与功能第10-16页
     ·甜味蛋白的甜味机理第16-17页
     ·基因工程在技术蛋白研究中的应用第17-20页
     ·甜味蛋白应用现状及前景第20-21页
   ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展第21-25页
     ·巴斯德毕赤酵母表达系统简介第21-22页
     ·表达载体的发展第22-23页
     ·受体菌第23页
     ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达第23-24页
     ·毕赤酵母表达外源蛋白的影响因素及解决方案第24-25页
     ·应用前景及展望第25页
   ·研究的目的和意义第25-27页
第二章 甜味蛋白Brazzein 基因的人工合成及pUC57-Bra 载体的构建第27-37页
   ·材料第27-30页
     ·菌株及质粒第27页
     ·工具酶与试剂第27页
     ·主要仪器第27页
     ·溶液第27-29页
     ·培养基第29-30页
   ·方法第30-34页
     ·Brazzein 基因的人工合成与克隆第30-33页
     ·重组质粒的鉴定第33-34页
   ·结果第34-37页
     ·甜味蛋白Brazzein 基因的人工合成第34页
     ·PCR 产物酶切纯化结果第34-35页
     ·重组质粒pUC57-Bra PCR 鉴定结果第35页
     ·重组质粒pUC57-Bra 酶切鉴定电泳结果第35页
     ·重组质粒pUC57-Bra 序列测定结果第35-37页
第三章 pGAPZaA-Br 表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达第37-52页
   ·材料第37-40页
     ·菌株及质粒第37页
     ·工具酶与试剂第37页
     ·主要仪器第37页
     ·溶液与培养基第37-40页
   ·方法第40-47页
     ·酵母表达载体pGAPZaA-Bra 的构建策略第40页
     ·酵母表达系统表达甜味蛋白的策略第40-41页
     ·酵母表达载体pGAPZaA-Bra 的构建第41-43页
     ·重组酵母表达载体的鉴定第43-44页
     ·pGAPZαA-Bra 转化毕赤酵母SMD1168 转化试验第44-45页
     ·重组毕赤酵母SMD1168 的筛选第45-46页
     ·甜味重组蛋白的表达与纯化第46-47页
     ·酵母表达甜味蛋白生物学活性检测第47页
   ·结果第47-52页
     ·重组酵母表达质粒pGAPZαA-Bra 鉴定第47-49页
     ·重组毕赤酵母SMD1168 基因组的PCR 鉴定第49页
     ·甜味重组蛋白的表达与纯化第49-51页
     ·酵母表达甜味蛋白生物学活性检测结果第51-52页
第四章 讨论第52-55页
   ·酵母表达系统第52页
   ·PCR 引物设计第52页
   ·转染酵母所用质粒的线性化及对酵母细胞的转化第52-53页
   ·表达条件的优化第53-54页
   ·甜味蛋白生物活性检测第54-55页
第五章 结论第55-56页
参考文献第56-63页
致谢第63-64页
作者简历第64页

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