| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-27页 |
| ·甜味蛋白的研究进展 | 第8-21页 |
| ·甜味蛋白概述 | 第8-9页 |
| ·甜味蛋白的种类与特点 | 第9-10页 |
| ·甜味蛋白的结构与功能 | 第10-16页 |
| ·甜味蛋白的甜味机理 | 第16-17页 |
| ·基因工程在技术蛋白研究中的应用 | 第17-20页 |
| ·甜味蛋白应用现状及前景 | 第20-21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第21-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第21-22页 |
| ·表达载体的发展 | 第22-23页 |
| ·受体菌 | 第23页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的影响因素及解决方案 | 第24-25页 |
| ·应用前景及展望 | 第25页 |
| ·研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 甜味蛋白Brazzein 基因的人工合成及pUC57-Bra 载体的构建 | 第27-37页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·菌株及质粒 | 第27页 |
| ·工具酶与试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·溶液 | 第27-29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-34页 |
| ·Brazzein 基因的人工合成与克隆 | 第30-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-37页 |
| ·甜味蛋白Brazzein 基因的人工合成 | 第34页 |
| ·PCR 产物酶切纯化结果 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pUC57-Bra PCR 鉴定结果 | 第35页 |
| ·重组质粒pUC57-Bra 酶切鉴定电泳结果 | 第35页 |
| ·重组质粒pUC57-Bra 序列测定结果 | 第35-37页 |
| 第三章 pGAPZaA-Br 表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达 | 第37-52页 |
| ·材料 | 第37-40页 |
| ·菌株及质粒 | 第37页 |
| ·工具酶与试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·溶液与培养基 | 第37-40页 |
| ·方法 | 第40-47页 |
| ·酵母表达载体pGAPZaA-Bra 的构建策略 | 第40页 |
| ·酵母表达系统表达甜味蛋白的策略 | 第40-41页 |
| ·酵母表达载体pGAPZaA-Bra 的构建 | 第41-43页 |
| ·重组酵母表达载体的鉴定 | 第43-44页 |
| ·pGAPZαA-Bra 转化毕赤酵母SMD1168 转化试验 | 第44-45页 |
| ·重组毕赤酵母SMD1168 的筛选 | 第45-46页 |
| ·甜味重组蛋白的表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·酵母表达甜味蛋白生物学活性检测 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·重组酵母表达质粒pGAPZαA-Bra 鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组毕赤酵母SMD1168 基因组的PCR 鉴定 | 第49页 |
| ·甜味重组蛋白的表达与纯化 | 第49-51页 |
| ·酵母表达甜味蛋白生物学活性检测结果 | 第51-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-55页 |
| ·酵母表达系统 | 第52页 |
| ·PCR 引物设计 | 第52页 |
| ·转染酵母所用质粒的线性化及对酵母细胞的转化 | 第52-53页 |
| ·表达条件的优化 | 第53-54页 |
| ·甜味蛋白生物活性检测 | 第54-55页 |
| 第五章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
