摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-12页 |
1 绪论 | 第12-28页 |
·研究背景 | 第12-25页 |
·埃博霉素的发现和特点 | 第12-14页 |
·埃博霉素的合成方法 | 第14-16页 |
·埃博霉素生物合成途径 | 第16-18页 |
·埃博霉素的临床进展 | 第18-21页 |
·纤维堆囊菌的研究进展 | 第21-24页 |
·小结 | 第24-25页 |
·研究的目标和内容 | 第25页 |
·创新之处 | 第25-28页 |
2 埃博霉素的发酵和纯化 | 第28-48页 |
·技术路线 | 第28-29页 |
·主要材料 | 第29-30页 |
·菌株和质粒 | 第29页 |
·主要试剂 | 第29页 |
·主要仪器设备 | 第29页 |
·主要溶液配制 | 第29-30页 |
·主要方法 | 第30-33页 |
·菌种的保存和复苏 | 第30页 |
·固体培养基的选择 | 第30页 |
·优化发酵条件 | 第30-31页 |
·埃博霉素的检测方法 | 第31-32页 |
·分离和纯化 | 第32-33页 |
·结果与分析 | 第33-48页 |
·菌种的保存和复苏 | 第33-34页 |
·固体培养基的选择 | 第34-35页 |
·建立埃博霉素的检测体系 | 第35-40页 |
·发酵条件的优化 | 第40-43页 |
·分离和纯化 | 第43-48页 |
3 建立纤维堆囊菌的转化体系 | 第48-80页 |
·技术路线 | 第48页 |
·主要材料 | 第48-50页 |
·菌株和质粒 | 第48-49页 |
·主要试剂 | 第49页 |
·主要仪器设备 | 第49页 |
·主要溶液配制 | 第49-50页 |
·主要方法 | 第50-62页 |
·基因组DNA 制备 | 第50-51页 |
·纤维堆囊菌So ce90 的抗性实验 | 第51页 |
·pRP-GFP 载体构建 | 第51-57页 |
·接合转移 | 第57页 |
·转化子的荧光检测 | 第57页 |
·转化子的PCR 检测 | 第57-58页 |
·Southern 杂交分析 | 第58-61页 |
·转化子的稳定性 | 第61-62页 |
·结合转移的效率 | 第62页 |
·结果与分析 | 第62-80页 |
·纤维堆囊菌基因组DNA 提取 | 第62-63页 |
·纤维堆囊菌So ce90 的抗性实验 | 第63-65页 |
·pRP-GFP 的构建 | 第65-68页 |
·转化菌株的荧光显微观察 | 第68-70页 |
·转化菌株的PCR 鉴定 | 第70-71页 |
·Southern 杂交分析 | 第71-75页 |
·转化子的稳定性 | 第75-76页 |
·结合转移的效率 | 第76-77页 |
·EpoPro 的启动活性分析 | 第77-78页 |
·pBBR1MCS 对纤维堆囊菌So ce90 的转化实验 | 第78-80页 |
4 讨论 | 第80-86页 |
·埃博霉素发酵、纯化中存在的问题 | 第80-82页 |
·严格控制发酵时间 | 第80页 |
·树脂XAD-16 的利弊 | 第80-82页 |
·盐离子的监控 | 第82页 |
·纤维堆囊菌的结合转移策略 | 第82-86页 |
·质粒pRK415 的特点 | 第83页 |
·GFP 基因引入 | 第83-84页 |
·EpoPro 片段的引入 | 第84页 |
·载体pRP-GFP 应用前景 | 第84-86页 |
5 结论与展望 | 第86-87页 |
致谢 | 第87-88页 |
参考文献 | 第88-98页 |
附录:博士期间论文发表情况 | 第98页 |