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纤维堆囊菌基因转化体系建立及埃博霉素生物发酵和纯化工艺研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
1 绪论第12-28页
   ·研究背景第12-25页
     ·埃博霉素的发现和特点第12-14页
     ·埃博霉素的合成方法第14-16页
     ·埃博霉素生物合成途径第16-18页
     ·埃博霉素的临床进展第18-21页
     ·纤维堆囊菌的研究进展第21-24页
     ·小结第24-25页
   ·研究的目标和内容第25页
   ·创新之处第25-28页
2 埃博霉素的发酵和纯化第28-48页
   ·技术路线第28-29页
   ·主要材料第29-30页
     ·菌株和质粒第29页
     ·主要试剂第29页
     ·主要仪器设备第29页
     ·主要溶液配制第29-30页
   ·主要方法第30-33页
     ·菌种的保存和复苏第30页
     ·固体培养基的选择第30页
     ·优化发酵条件第30-31页
     ·埃博霉素的检测方法第31-32页
     ·分离和纯化第32-33页
   ·结果与分析第33-48页
     ·菌种的保存和复苏第33-34页
     ·固体培养基的选择第34-35页
     ·建立埃博霉素的检测体系第35-40页
     ·发酵条件的优化第40-43页
     ·分离和纯化第43-48页
3 建立纤维堆囊菌的转化体系第48-80页
   ·技术路线第48页
   ·主要材料第48-50页
     ·菌株和质粒第48-49页
     ·主要试剂第49页
     ·主要仪器设备第49页
     ·主要溶液配制第49-50页
   ·主要方法第50-62页
     ·基因组DNA 制备第50-51页
     ·纤维堆囊菌So ce90 的抗性实验第51页
     ·pRP-GFP 载体构建第51-57页
     ·接合转移第57页
     ·转化子的荧光检测第57页
     ·转化子的PCR 检测第57-58页
     ·Southern 杂交分析第58-61页
     ·转化子的稳定性第61-62页
     ·结合转移的效率第62页
   ·结果与分析第62-80页
     ·纤维堆囊菌基因组DNA 提取第62-63页
     ·纤维堆囊菌So ce90 的抗性实验第63-65页
     ·pRP-GFP 的构建第65-68页
     ·转化菌株的荧光显微观察第68-70页
     ·转化菌株的PCR 鉴定第70-71页
     ·Southern 杂交分析第71-75页
     ·转化子的稳定性第75-76页
     ·结合转移的效率第76-77页
     ·EpoPro 的启动活性分析第77-78页
     ·pBBR1MCS 对纤维堆囊菌So ce90 的转化实验第78-80页
4 讨论第80-86页
   ·埃博霉素发酵、纯化中存在的问题第80-82页
     ·严格控制发酵时间第80页
     ·树脂XAD-16 的利弊第80-82页
     ·盐离子的监控第82页
   ·纤维堆囊菌的结合转移策略第82-86页
     ·质粒pRK415 的特点第83页
     ·GFP 基因引入第83-84页
     ·EpoPro 片段的引入第84页
     ·载体pRP-GFP 应用前景第84-86页
5 结论与展望第86-87页
致谢第87-88页
参考文献第88-98页
附录:博士期间论文发表情况第98页

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