| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第11-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的宿主菌 | 第11-12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的表达质粒 | 第12-13页 |
| ·表达质粒与巴斯德毕赤酵母表达系统宿主菌基因组整合的方式 | 第13页 |
| ·影响Pichia pastoris表达系统表达外源蛋白的因素 | 第13-14页 |
| ·Pichia Pastoris表达系统的优化策略 | 第14-16页 |
| ·BMP-7的研究概况 | 第16-18页 |
| ·BMPs的研究概况 | 第16页 |
| ·hBMP-7的研究概况 | 第16-17页 |
| ·hBMP-7的分子特征及生理活性 | 第17-18页 |
| ·FURIN的研究概况 | 第18-19页 |
| ·分子内分子伴侣的作用 | 第19-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-25页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第26-28页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-37页 |
| ·质粒的提取 | 第29页 |
| ·限制性内切酶酶切质粒 | 第29-30页 |
| ·PCR反应 | 第30-31页 |
| ·SOEPCR(splicing by overlap extension PCR)反应 | 第31-32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·细菌的转化 | 第32-33页 |
| ·细菌转化子的鉴定 | 第33页 |
| ·电转化酵母细胞 | 第33-34页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第34页 |
| ·酵母转化子的小量摇瓶培养 | 第34页 |
| ·表达产物的DOT-BLOT分析 | 第34-35页 |
| ·表达产物的WESTERN-BLOT分析 | 第35-37页 |
| 第3章 实验结果与结论 | 第37-55页 |
| ·hBMP-7在毕赤酵母中的高水平表达 | 第37-44页 |
| ·hBMP-7蛋白的成熟肽全序列优化 | 第37页 |
| ·pAO815-a-factor-hBMP-7m-1c(单拷贝)表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·分泌型hBMP-7成熟肽的多拷贝表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·酵母转化子的筛选 | 第40-42页 |
| ·不同拷贝数hBMP-7m酵母转化子表达产物的DOT-BLOT分析 | 第42页 |
| ·不同拷贝数hBMP-7m酵母转化子表达产物的WESTERN-BLOT分析 | 第42-44页 |
| ·hBMP-7的-RSIR-序列定点突变及pPic9K-hBMP7pmk在毕赤酵母中的表达 | 第44-49页 |
| ·用SOEPCR的方法对hBMP-7蛋白-RSIR-位点进行定点突变及表达质粒pPic9K-hBMP-7pmk的构建 | 第44-47页 |
| ·pPic9K-hBMP7pmk酵母转化子的筛选 | 第47-48页 |
| ·pPic9K-hBMP-7pmk酵母转化子表达产物的DOT-BLOT和WESTERN BLOT分析 | 第48-49页 |
| ·hBMP-7pm和FURIN在毕赤酵母中共表达菌株的转化及筛选 | 第49-55页 |
| ·表达质粒pPic9K-hBMP7pm和pAO815-Furin的构建 | 第49-52页 |
| ·pAO815-Furin和pPic9K-hBMP7-pm共转化的酵母转化子的筛选 | 第52-55页 |
| 第4章 分析与讨论 | 第55-61页 |
| ·hBMP-7在毕赤酵母表达系统中的高水平表达 | 第55-57页 |
| ·hBMP-7的-RSIR-序列定点突变及其在毕赤酵母中的表达 | 第57-58页 |
| ·hBMP-7pm蛋白和FURIN蛋白在毕赤酵母中的共表达 | 第58-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第71-72页 |
| 个人简历 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
