| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 图表清单 | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-19页 |
| ·植物甾醇与三萜皂苷的研究进展 | 第13-16页 |
| ·植物甾醇的主要生理功能和应用 | 第13-15页 |
| ·降低血清中的胆固醇 | 第13-14页 |
| ·作为抗癌物质 | 第14页 |
| ·防治前列腺疾病 | 第14页 |
| ·植物甾醇的安全性以及在食品中的应用 | 第14-15页 |
| ·三萜皂苷的主要生物活性及药理作用 | 第15页 |
| ·抗癌活性 | 第15页 |
| ·抗病毒功效 | 第15页 |
| ·保肝作用 | 第15页 |
| ·植物甾醇与三萜皂苷的生物合成途径 | 第15-16页 |
| ·鲨烯合酶研究进展 | 第16-19页 |
| ·鲨烯合酶是植物甾醇与三萜皂苷共同代谢途径的关键酶 | 第16-17页 |
| ·鲨烯合酶的反应机理 | 第17页 |
| ·鲨烯合酶基因的克隆 | 第17-18页 |
| ·鲨烯合酶基因表达与调控 | 第18页 |
| ·鲨烯合酶抑制剂在临床治疗中的应用 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·菌种 | 第19页 |
| ·酶及试剂盒等 | 第19页 |
| ·主要溶液 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·常用的生物信息分析的相关软件及网站 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-38页 |
| ·总RNA的提取和检测 | 第20-21页 |
| ·准备工作 | 第20页 |
| ·RNA抽提 | 第20-21页 |
| ·检测所抽提的RNA的质量 | 第21页 |
| ·目的基因保守区域的获得 | 第21-25页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第21-22页 |
| ·目的基因保守区域的PCR | 第22-23页 |
| ·目的片段的回收 | 第23页 |
| ·回收目的片段的连接 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第24页 |
| ·连接产物转化DH5a感受态细胞 | 第24页 |
| ·PCR鉴定目的基因及测序 | 第24-25页 |
| ·3′-RACE获得目的基因的3′端 | 第25-27页 |
| ·第一链cDNA的获得 | 第25页 |
| ·3′-RACE的PCR | 第25-27页 |
| ·5′-RACE获得目的基因的5′端 | 第27-29页 |
| ·第一链cDNA的获得 | 第27-28页 |
| ·目的基因的5’末端的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·SQS基因开放阅读框(ORF)的克隆 | 第29-30页 |
| ·SQS基因的原核表达 | 第30-35页 |
| ·pET载体的制备 | 第30-32页 |
| ·pET-28a(+)质粒的抽提 | 第31-32页 |
| ·pET-28a(+)质粒的双酶切及载体大片段的回收纯化 | 第32页 |
| ·目的基因与pET-28a载体大片段的连接 | 第32-34页 |
| ·获取重组质粒的表达菌种 | 第34页 |
| ·重组质粒转化BL21感受态细胞 | 第34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·诱导表达 | 第34-35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-38页 |
| ·试剂的制备 | 第35页 |
| ·表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第35-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| ·总RNA的提取 | 第38页 |
| ·葡萄SQS基因ORF的克隆 | 第38-44页 |
| ·扩增保守序列区域 | 第39页 |
| ·3′-RACE | 第39-40页 |
| ·5′-RACE | 第40-41页 |
| ·目的基因全长cDNA序列拼接及其序列分析 | 第41-44页 |
| ·原核表达 | 第44-45页 |
| ·ORF的体外重组 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE电泳结果 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·RACE的成败 | 第45-46页 |
| ·原核表达 | 第46-48页 |
| 4 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |