| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-22页 |
| ·纤维素的结构及降解 | 第9-12页 |
| ·纤维素的结构 | 第9-10页 |
| ·分解纤维素的微生物 | 第10-12页 |
| ·纤维素酶概述 | 第12-17页 |
| ·纤维素酶的种类 | 第12页 |
| ·降解纤维素的机理 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的分子结构和功能 | 第13-15页 |
| ·纤维素酶的研究进展 | 第15页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第15-17页 |
| ·宏基因组技术及应用 | 第17-21页 |
| ·宏基因组技术 | 第17-21页 |
| ·宏基因组技术的应用 | 第21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-38页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·样品采集 | 第22页 |
| ·牛瘤胃样品的富集 | 第22页 |
| ·菌种保存 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-23页 |
| ·培养基、培养条件和抗生素 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-38页 |
| ·质粒提取 | 第25-26页 |
| ·DNA的酶切、连接和电泳 | 第26页 |
| ·电透析洗脱法回收DNA片段 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化 | 第27-28页 |
| ·牛瘤胃样品宏基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·牛瘤胃样品宏基因组DNA的纯化 | 第29-30页 |
| ·水牛瘤胃富集培养物宏基因组文库的构建 | 第30-31页 |
| ·文库中表达纤维素酶活性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| ·文库中纤维素酶基因的克隆 | 第32页 |
| ·PCR引物设计与基因扩增 | 第32-33页 |
| ·基因的表达与检测 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE电泳过程 | 第34-35页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·内切葡聚糖酶的酶活测定 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-55页 |
| ·牛瘤胃未培养微生物的富集培养 | 第38页 |
| ·牛瘤胃样品的富集培养 | 第38-39页 |
| ·牛瘤胃富集培养微生物总DNA的提取及纯化 | 第39-40页 |
| ·宏基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·宏基因组DNA的纯化 | 第39-40页 |
| ·宏基因组文库的构建及评价 | 第40-41页 |
| ·宏基因组文库中纤维素酶活性克隆的筛选 | 第41-42页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5K的克隆和鉴定 | 第42-46页 |
| ·EPI100/pC3的亚克隆 | 第42页 |
| ·umcel5K基因的鉴定与序列分析 | 第42-46页 |
| ·umcel5K基因的表达与表达产物Umcel5K的纯化 | 第46-48页 |
| ·Umcel5K的酶学特性分析 | 第48-55页 |
| ·内切葡聚糖酶Umcel5K的纯化结果 | 第48-49页 |
| ·Umcel5K的最适反应pH值 | 第49-50页 |
| ·Umcel5K的最适反应温度 | 第50-51页 |
| ·Umcel5K的pH耐受性 | 第51-52页 |
| ·Umcel5K的温度耐受性 | 第52-53页 |
| ·Umcel5K的酶反应动力学常数Km和Vmax测定 | 第53页 |
| ·金属离子、螯合剂、表面活性剂对Umcel5K酶活力的影响 | 第53-55页 |
| 第四章 结果分析与讨论 | 第55-58页 |
| ·样品采集和培养 | 第55页 |
| ·文库的构建 | 第55-56页 |
| ·umcel5K基因的筛选与鉴定 | 第56页 |
| ·重组内切葡聚糖酶Umcel5K的纯化和酶学特性鉴定 | 第56-57页 |
| ·内切葡聚糖酶的应用前景 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参与的科研、取得的奖励和发表论文情况 | 第65页 |
