中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-29页 |
一、组蛋白乙酰化修饰与真核生物基因的转录调控 | 第10-22页 |
(一) 真核生物的染色质结构和与转录调控的关系 | 第10-13页 |
(二) 组蛋白乙酰化修饰与转录调控 | 第13-14页 |
(三) 组蛋白乙酰基转移酶和去乙酰化酶 | 第14-22页 |
二、热休克蛋白的生物学功能及其表达调控 | 第22-29页 |
(一) 热休克蛋白的发现,分类及生物学功能 | 第22-23页 |
(二) 热休克蛋白的表达调控 | 第23-26页 |
(三) Hsp70 家族研究简介 | 第26-28页 |
(四) 热休克蛋白的研究展望 | 第28-29页 |
第二章 引言 | 第29-33页 |
一、研究背景和立题依据 | 第29-31页 |
(一) Gcn5 和Elp3 的研究背景 | 第29-30页 |
(二) 立题依据 | 第30-31页 |
二、本文的研究内容和意义 | 第31-33页 |
第三章 Gcn5 和Elp3 对ssa3 和ssa4 基因转录调控的影响及机制研究 | 第33-64页 |
一、实验材料与方法 | 第33-44页 |
Ⅰ.实验材料 | 第33-34页 |
(一) 质粒 | 第33页 |
(二) 抗体 | 第33页 |
(三) 试剂 | 第33-34页 |
(四) 酿酒酵母菌株 | 第34页 |
Ⅱ.实验方法 | 第34-44页 |
(一) 酵母的培养 | 第34-35页 |
(二) 酵母基因组 DNA 的提取 | 第35-36页 |
(三) Gcn5 全长及突变表达质粒的构建 | 第36页 |
(四) 酵母的高效转化 | 第36-37页 |
(五) 功能互补实验 | 第37页 |
(六) ssa3和ssa4 的诱导表达 | 第37页 |
(七) 逆转录 | 第37-39页 |
(八) 染色质免疫沉淀实验 | 第39-42页 |
(九) PCR 和荧光适时定量PCR | 第42-44页 |
二、实验结果与分析 | 第44-60页 |
(一) Gcn5 全长及 HAT 结构域缺失突变表达质粒的构建 | 第44页 |
(二) 组蛋白 H3 乙酰化参与了ssa3 和ssa4 基因的转录调控 | 第44-46页 |
(三) Gcn5 和Elp3 参与ssa3 和ssa4 基因的转录调控 | 第46-48页 |
(四) Gcn5 和Elp3 影响ssa3 和ssa4 基因上的组蛋白 H3 的乙酰化 | 第48-50页 |
(五) RNAPII 与Gcn5 和 Elp3 之间的相互作用关系 | 第50-53页 |
(六) HSF 与Gcn5 和Elp3 之间的作用关系 | 第53-54页 |
(七) Swi/Snf 与Gcn5 和Elp3 之间的作用关系 | 第54-55页 |
(八) HDAC 参与了ssa3 和ssa4 基因的转录调控 | 第55-57页 |
(九) Set2 影响ssa3 和ssa4 基因上可逆的乙酰化修饰转录调控 | 第57-60页 |
三、讨论 | 第60-64页 |
(一) 核小体解体与转录结合的组蛋白乙酰化 | 第60-61页 |
(二) Gcn5 和Elp3 的功能重叠:相似和不同 | 第61-62页 |
(三) Swi/Snf,HSF 和 Gcn5 之间的相互作用关系 | 第62页 |
(四) hsp70 基因编码区可逆的乙酰化对其转录的影响 | 第62-64页 |
第四章 人细胞中hElp3 对hsp70-2 基因转录的影响及机制研究 | 第64-81页 |
一、实验材料与方法 | 第64-73页 |
Ⅰ.实验材料 | 第64页 |
(一) 哺乳动物细胞系 | 第64页 |
(二) 主要试剂 | 第64页 |
Ⅱ.实验方法 | 第64-73页 |
(一) 反义寡脱氧核苷酸片段的合成 | 第64页 |
(二) 哺乳动物细胞系的培养 | 第64-65页 |
(三) 真核生物细胞的瞬时转染 | 第65页 |
(四) 细胞总蛋白的提取 | 第65页 |
(五) SDS-PAGE 电泳和免疫印记 | 第65-67页 |
(六) 酶联免疫吸附实验 | 第67-68页 |
(七) 哺乳动物细胞总 RNA 的提取 | 第68-69页 |
(八) 染色质免疫沉淀实验 | 第69-72页 |
(九) PCR 和荧光适时定量PCR | 第72-73页 |
二、实验结果与分析 | 第73-79页 |
(一) 利用反义寡脱氧核苷酸片段抑制内源help3 mRNA 和蛋白水平的表达 | 第73页 |
(二) 细胞内hElp3 水平的降低可抑制hsp70-2 的表达 | 第73-75页 |
(三) hElp3 被招募到hsp70-2 基因上 | 第75页 |
(四) hElp3 影响hsp70-2 上组蛋白H3 的乙酰化 | 第75-77页 |
(五) hElp3 影响RNAPII 在hsp70-2 上的延伸 | 第77-79页 |
三、讨论 | 第79-81页 |
(一) hsp70-2 基因转录通过染色质模板的机制 | 第79-80页 |
(二) hElp3调控hsp70-2基因转录的机制 | 第80-81页 |
主要结论 | 第81-82页 |
主要创新点 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-96页 |
附录 | 第96-98页 |
致谢 | 第98-99页 |
作者简介 | 第99-100页 |
在学期间公开发表论文及著作情况 | 第100页 |