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组蛋白H3乙酰化在热休克蛋白70基因转录调控中的作用及机制研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-10页
第一章 文献综述第10-29页
 一、组蛋白乙酰化修饰与真核生物基因的转录调控第10-22页
  (一) 真核生物的染色质结构和与转录调控的关系第10-13页
  (二) 组蛋白乙酰化修饰与转录调控第13-14页
  (三) 组蛋白乙酰基转移酶和去乙酰化酶第14-22页
 二、热休克蛋白的生物学功能及其表达调控第22-29页
  (一) 热休克蛋白的发现,分类及生物学功能第22-23页
  (二) 热休克蛋白的表达调控第23-26页
  (三) Hsp70 家族研究简介第26-28页
  (四) 热休克蛋白的研究展望第28-29页
第二章 引言第29-33页
 一、研究背景和立题依据第29-31页
  (一) Gcn5 和Elp3 的研究背景第29-30页
  (二) 立题依据第30-31页
 二、本文的研究内容和意义第31-33页
第三章 Gcn5 和Elp3 对ssa3 和ssa4 基因转录调控的影响及机制研究第33-64页
 一、实验材料与方法第33-44页
  Ⅰ.实验材料第33-34页
   (一) 质粒第33页
   (二) 抗体第33页
   (三) 试剂第33-34页
   (四) 酿酒酵母菌株第34页
  Ⅱ.实验方法第34-44页
   (一) 酵母的培养第34-35页
   (二) 酵母基因组 DNA 的提取第35-36页
   (三) Gcn5 全长及突变表达质粒的构建第36页
   (四) 酵母的高效转化第36-37页
   (五) 功能互补实验第37页
   (六) ssa3和ssa4 的诱导表达第37页
   (七) 逆转录第37-39页
   (八) 染色质免疫沉淀实验第39-42页
   (九) PCR 和荧光适时定量PCR第42-44页
 二、实验结果与分析第44-60页
  (一) Gcn5 全长及 HAT 结构域缺失突变表达质粒的构建第44页
  (二) 组蛋白 H3 乙酰化参与了ssa3 和ssa4 基因的转录调控第44-46页
  (三) Gcn5 和Elp3 参与ssa3 和ssa4 基因的转录调控第46-48页
  (四) Gcn5 和Elp3 影响ssa3 和ssa4 基因上的组蛋白 H3 的乙酰化第48-50页
  (五) RNAPII 与Gcn5 和 Elp3 之间的相互作用关系第50-53页
  (六) HSF 与Gcn5 和Elp3 之间的作用关系第53-54页
  (七) Swi/Snf 与Gcn5 和Elp3 之间的作用关系第54-55页
  (八) HDAC 参与了ssa3 和ssa4 基因的转录调控第55-57页
  (九) Set2 影响ssa3 和ssa4 基因上可逆的乙酰化修饰转录调控第57-60页
 三、讨论第60-64页
  (一) 核小体解体与转录结合的组蛋白乙酰化第60-61页
  (二) Gcn5 和Elp3 的功能重叠:相似和不同第61-62页
  (三) Swi/Snf,HSF 和 Gcn5 之间的相互作用关系第62页
  (四) hsp70 基因编码区可逆的乙酰化对其转录的影响第62-64页
第四章 人细胞中hElp3 对hsp70-2 基因转录的影响及机制研究第64-81页
 一、实验材料与方法第64-73页
  Ⅰ.实验材料第64页
   (一) 哺乳动物细胞系第64页
   (二) 主要试剂第64页
  Ⅱ.实验方法第64-73页
   (一) 反义寡脱氧核苷酸片段的合成第64页
   (二) 哺乳动物细胞系的培养第64-65页
   (三) 真核生物细胞的瞬时转染第65页
   (四) 细胞总蛋白的提取第65页
   (五) SDS-PAGE 电泳和免疫印记第65-67页
   (六) 酶联免疫吸附实验第67-68页
   (七) 哺乳动物细胞总 RNA 的提取第68-69页
   (八) 染色质免疫沉淀实验第69-72页
   (九) PCR 和荧光适时定量PCR第72-73页
 二、实验结果与分析第73-79页
  (一) 利用反义寡脱氧核苷酸片段抑制内源help3 mRNA 和蛋白水平的表达第73页
  (二) 细胞内hElp3 水平的降低可抑制hsp70-2 的表达第73-75页
  (三) hElp3 被招募到hsp70-2 基因上第75页
  (四) hElp3 影响hsp70-2 上组蛋白H3 的乙酰化第75-77页
  (五) hElp3 影响RNAPII 在hsp70-2 上的延伸第77-79页
 三、讨论第79-81页
  (一) hsp70-2 基因转录通过染色质模板的机制第79-80页
  (二) hElp3调控hsp70-2基因转录的机制第80-81页
主要结论第81-82页
主要创新点第82-83页
参考文献第83-96页
附录第96-98页
致谢第98-99页
作者简介第99-100页
在学期间公开发表论文及著作情况第100页

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