| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 综述:含ADF-H结构域蛋白质家族的结构和功能 | 第11-38页 |
| 1.含ADF-H结构域的蛋白质家族的来源和分类 | 第11-13页 |
| 2.含ADF-H结构域的蛋白质家族的功能 | 第13-22页 |
| ·ADF/cofilin的功能 | 第13-17页 |
| ·twinfilin的功能 | 第17-20页 |
| ·Drebrin/Abpls的功能 | 第20-21页 |
| ·Coactosin/CLPs的功能 | 第21-22页 |
| 3.ADF-H结构域的结构以及它们与actin的相互作用 | 第22-25页 |
| 4.ADF/cofilin的磷酸化和pH效应 | 第25-26页 |
| 5.ADF/cofilin和其它ABPs的关系 | 第26-29页 |
| ·ADF/cofilin-actin与其它ABP的三重复合物 | 第27-28页 |
| ·ADF/cofilin对Tropomyosin与F-actin结合的调控 | 第28-29页 |
| 6.展望 | 第29页 |
| 参考文献 | 第29-38页 |
| 第二章 human coactosin like protein(hCLP)的溶液结构及其与F-actin的结合模型 | 第38-92页 |
| 第一部分:hCLP介绍 | 第38-39页 |
| 第二部分:材料和方法 | 第39-62页 |
| 1.hCLP基因的引物设计及PCR | 第39-41页 |
| 2.PCR产物胶回收和含hCLP基因的T载体的克隆 | 第41-42页 |
| 3.表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 4.大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒(连接反应物)的转化 | 第45页 |
| 5.hCLP的表达与纯化 | 第45-46页 |
| 6.蛋白质浓度的测定 | 第46-47页 |
| 7.hCLP的稳定性实验 | 第47页 |
| 8.~(15)N-标记和~(15)N,~(13)C双标记重组人hCLP蛋白质的生产 | 第47-48页 |
| 9.NMR实验与数据变换 | 第48-50页 |
| 10.主链顺序认证及侧链化学位移的获得 | 第50-53页 |
| 11.氢氘交换实验 | 第53页 |
| 12.CSI进行二级结构预测 | 第53-54页 |
| 13.结构计算 | 第54-57页 |
| 14.主链驰豫的测定 | 第57页 |
| 15.肌动蛋白的抽提和纯化 | 第57-59页 |
| 16.hCLP的点突变和突变蛋白质的表达 | 第59页 |
| 17.圆二色光谱(CD) | 第59-60页 |
| 18.超速离心共沉降实验 | 第60页 |
| 19.NMR滴定实验 | 第60-61页 |
| 20.Docking实验 | 第61-62页 |
| 第三部分:结果和讨论 | 第62-88页 |
| 1.hCLP的基因克隆和表达载体构建 | 第62页 |
| 2.hCLP的表达和纯化 | 第62-63页 |
| 3.hCLP容易被蛋白酶从C末端降解,而EDTA可以抑制这种降解 | 第63-64页 |
| 4.hCLP的均一性分析 | 第64-65页 |
| 5.hCLP D123N的化学位移认证 | 第65-66页 |
| 6.hCLP的氢氘交换实验 | 第66页 |
| 7.CSI方法对hCLP的二级结构分析 | 第66-67页 |
| 8.hCLP的蛋白质的结构计算和结构描述 | 第67-70页 |
| 9.hCLP的结构与ADF-H家族蛋白质的结构比较 | 第70-72页 |
| 10.hCLP的结构与gelsolin家族的结构比较 | 第72-74页 |
| 11.hCLP的主链动力学实验说明hCLP的β4和β5之间的区域有很大的柔性 | 第74-76页 |
| 12.actin的纯化以及NMR滴定实验 | 第76-79页 |
| 13.hCLP点突变的选择以及突变蛋白质的纯化 | 第79页 |
| 14.hCLP以及其突变蛋白质与F-actin的超速离心共沉降实验 | 第79-81页 |
| 15.hCLP与F-actin的复合物的结构模型 | 第81-84页 |
| 16.对于实验结果的讨论 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 第三章 综述:CH结构域的结构与功能 | 第92-108页 |
| 1.CH结构域的来源及含CH结构域蛋白的分类 | 第92页 |
| 2.CH结构域的结构特点 | 第92-93页 |
| 3.由CH1和CH2结构域组成的actin结合结构域 | 第93-98页 |
| ·ABD与F-actin的结合 | 第94-96页 |
| ·ABD的调控 | 第96-97页 |
| ·Fimbrin | 第97-98页 |
| ·CH结构域之间的linker | 第98页 |
| 4.单独地CH2类结构域 | 第98-99页 |
| ·Smoothelin | 第99页 |
| ·MICAL | 第99页 |
| ·EB家族 | 第99页 |
| 5.CH3类蛋白质家族 | 第99-101页 |
| ·Calponin | 第100页 |
| ·Vav家族 | 第100-101页 |
| ·IQGAP | 第101页 |
| 6.CH4/CH5结构域 | 第101页 |
| 7.总结和展望 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 第四章 MICAL_1 CH结构域的溶液结构和功能研究 | 第108-138页 |
| 第一部分:引言 | 第108-110页 |
| 第二部分:材料和方法 | 第110-119页 |
| 1.MICAL_1的CH结构域的克隆和表达载体的构建 | 第110-111页 |
| 2.MICAL_1 CH的表达与纯化 | 第111-113页 |
| 3.蛋白质浓度的测定 | 第113页 |
| 4.MICAL_1 CH的稳定性实验 | 第113页 |
| 5.GST MICAL_1 CH的构建和表达纯化 | 第113-114页 |
| 6.MICAL_1 CH的均一性实验 | 第114页 |
| 7.~(15)N-标记和~(15)N,~(13)C双标记重组人MICAL_1 CH蛋白质的生产 | 第114页 |
| 8.NMR实验与结构计算 | 第114-117页 |
| 9.vimentin的构建、表达和纯化 | 第117页 |
| 10.MICA_1 CH和vimentin的GST pull down实验 | 第117-118页 |
| 11.MICA_1 CH和filament actin的共沉降实验 | 第118页 |
| 12.F-actin对MICAL_1 CH的滴定 | 第118-119页 |
| 13.PiP_2的粗产物的抽提以及对MICAL_1 CH的滴定 | 第119页 |
| 第三部分:结果和讨论 | 第119-134页 |
| 1.一组蛋白质结构域的克隆和表达的结果 | 第119-120页 |
| 2.MICA_1 CH的表达和纯化 | 第120-121页 |
| 3.MICA_1 CH在溶液中是以单体存在的 | 第121-122页 |
| 4.MICAL_1 CH的近紫外CD结果 | 第122-123页 |
| 5.MICAL_1 CH的化学位移认证 | 第123-125页 |
| 6.MICAL_1 CH的氢氘交换实验 | 第125页 |
| 7.MICAL_1 CH的蛋白质的结构计算和结构描述 | 第125-127页 |
| 8.MICAL_1 CH的结构与其它CH结构域的结构比较 | 第127-129页 |
| 9.MICAL_1 CH的不能独自与F-actin作用 | 第129-132页 |
| 10.MICAL_1 CH可能不与vimentin作用 | 第132-133页 |
| 11.MICAL_1 CH的可能的功能 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 发表论文 | 第139页 |
| 学术会议 | 第139页 |
