| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-54页 |
| ·脂肪酶 | 第14-17页 |
| ·脂肪酶简介 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的理化特性 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第16-17页 |
| ·微生物脂肪酶 | 第17-23页 |
| ·微生物脂肪酶来源 | 第17-18页 |
| ·微生物脂肪酶的纯化 | 第18-19页 |
| ·微生物脂肪酶的分子生物学 | 第19-23页 |
| ·微生物脂肪酶的应用 | 第23页 |
| ·根霉脂肪酶的研究进展 | 第23-28页 |
| ·根霉脂肪酶的筛选与发酵 | 第24-25页 |
| ·根霉脂肪酶的分子生物学研究 | 第25-27页 |
| ·根霉脂肪酶的应用研究 | 第27-28页 |
| ·微生物脂肪酶基因的表达 | 第28-33页 |
| ·微生物脂肪酶基因在原核细胞中的表达 | 第29页 |
| ·微生物脂肪酶基因在真核细胞中的表达 | 第29-31页 |
| ·影响微生物脂肪酶基因表达的因素 | 第31-33页 |
| ·酶分子的定向进化研究 | 第33-40页 |
| ·酶分子定向进化简介 | 第33-34页 |
| ·定向进化中文库构建的常用方法 | 第34-37页 |
| ·定向进化在酶改造中的应用 | 第37-40页 |
| ·本课题的设计思路和研究内容 | 第40-54页 |
| 第二章 少根根霉脂肪酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第54-74页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·材料和方法 | 第54-65页 |
| ·菌种与质粒 | 第54-55页 |
| ·试验试剂及仪器设备 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-72页 |
| ·少根根霉基因组提取 | 第65-66页 |
| ·ProRAL和RAL的PCR扩增 | 第66页 |
| ·重组子的鉴定 | 第66-67页 |
| ·测序结果分析 | 第67-69页 |
| ·大肠杆菌重组子的鉴定 | 第69-71页 |
| ·重组脂肪酶的表达 | 第71-72页 |
| ·重组脂肪酶活性测定 | 第72页 |
| ·小结 | 第72-74页 |
| 第三章 少根根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达及筛选 | 第74-86页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·材料和方法 | 第74-79页 |
| ·菌种与质粒 | 第74页 |
| ·试验试剂及仪器设备 | 第74-75页 |
| ·培养基 | 第75页 |
| ·试验方法 | 第75-79页 |
| ·结果和讨论 | 第79-84页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第79-80页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第80-81页 |
| ·酵母表型鉴定 | 第81-82页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第82页 |
| ·酵母产脂肪酶活性筛选 | 第82-84页 |
| ·小结 | 第84-86页 |
| 第四章 重组脂肪酶的纯化和性质鉴定 | 第86-99页 |
| ·引言 | 第86页 |
| ·材料和方法 | 第86-89页 |
| ·试验试剂及仪器设备 | 第86页 |
| ·试验方法 | 第86-89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-97页 |
| ·重组脂肪酶的纯化 | 第89-94页 |
| ·重组脂肪酶的性质分析 | 第94-97页 |
| ·小结 | 第97-99页 |
| 第五章 毕赤酵母发酵表达重组脂肪酶 | 第99-107页 |
| ·引言 | 第99页 |
| ·材料和方法 | 第99-101页 |
| ·菌种 | 第99页 |
| ·试验试剂及仪器设备 | 第99页 |
| ·培养基 | 第99-100页 |
| ·试验方法 | 第100-101页 |
| ·结果与讨论 | 第101-105页 |
| ·溶氧控制甲醇流加的脂肪酶发酵 | 第101-103页 |
| ·重组脂肪酶的性质分析 | 第103-105页 |
| ·小结 | 第105-107页 |
| 第六章 少根根霉脂肪酶分子定向进化研究 | 第107-124页 |
| ·引言 | 第107页 |
| ·材料和方法 | 第107-112页 |
| ·菌种与质粒 | 第107-108页 |
| ·试验试剂及仪器设备 | 第108页 |
| ·培养基 | 第108页 |
| ·试验方法 | 第108-112页 |
| ·结果和讨论 | 第112-123页 |
| ·重组酵母的鉴定 | 第112-114页 |
| ·易错PCR体系的建立 | 第114页 |
| ·DNA改组 | 第114-115页 |
| ·产脂肪酶酵母突变体库的构建和筛选 | 第115-116页 |
| ·突变脂肪酶的基因测序和分析 | 第116-117页 |
| ·突变脂肪酶的性质鉴定 | 第117-119页 |
| ·脂肪酶三维结构的模拟 | 第119-120页 |
| ·脂肪酶的定点突变 | 第120-121页 |
| ·突变脂肪酶热稳定提高的原因分析 | 第121-123页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| 第七章 枯草芽孢杆菌分泌表达脂肪酶载体的构建 | 第124-140页 |
| ·引言 | 第124-125页 |
| ·材料和方法 | 第125-133页 |
| ·菌种与质粒 | 第125页 |
| ·试验试剂及仪器设备 | 第125页 |
| ·培养基和溶液 | 第125-126页 |
| ·试验方法 | 第126-133页 |
| ·结果与讨论 | 第133-138页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第133页 |
| ·枯草芽孢杆菌分泌达脂肪酶载体的构建 | 第133-138页 |
| ·小结 | 第138-140页 |
| 第八章 结论 | 第140-142页 |
| 1 少根根霉脂肪酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第140页 |
| 2 proRAL和RAL基因在毕赤酵母中的表达 | 第140页 |
| 3.ProRAL和RAL的纯化及性质分析 | 第140-141页 |
| 4.毕赤酵母发酵产proRAL和RA L | 第141页 |
| 5.RAL的定向进化研究 | 第141页 |
| 6.枯草芽袍杆菌分泌表达脂肪酶载体的构建 | 第141-142页 |
| 本论文的创新点 | 第142-143页 |
| 问题与建议 | 第143-144页 |
| 附录 | 第144-147页 |
| 博士期间发表文章 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |