| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词 | 第7-8页 |
| 第一章 综述 | 第8-19页 |
| ·γ-微管蛋白研究现状 | 第8-10页 |
| ·γ-微管蛋白与植物微管组织中心 | 第10-13页 |
| ·病毒诱导的基因沉默 | 第13-18页 |
| ·本实验研究意义及技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 实验方法和材料 | 第19-30页 |
| ·实验材料和试剂 | 第19页 |
| ·主要实验方法 | 第19-21页 |
| ·质粒提取 | 第19页 |
| ·烟草叶片总RNA提取——TRIZol法提取RNA | 第19-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第20-21页 |
| ·PVX重组病毒载体的构建 | 第21-22页 |
| ·PCR鉴定21种重组病毒载体 | 第22-23页 |
| ·重组病毒载体转入农杆菌MOG101及其鉴定 | 第23页 |
| ·人工接种重组病毒载体 | 第23-24页 |
| ·重组病毒载体侵染烟草的表型观察 | 第24页 |
| ·重组病毒载体侵染烟草中重组病毒的表达规律 | 第24-25页 |
| ·Real—time PCR鉴定重组病毒载体侵染的烟草叶片γ-tubulin转录水平变化 | 第25-26页 |
| ·在组织水平和细胞水平观察γ-tubulin基因沉默烟草表型 | 第26-28页 |
| ·电子扫描显微镜观察烟草叶片 | 第26-27页 |
| ·徒手切片观察烟草叶片 | 第27页 |
| ·烟草保卫细胞骨架和叶绿体分布观察 | 第27-28页 |
| ·烟草花粉活力测定 | 第28页 |
| ·半定量RT—PCR分析γ-tubulin基因沉默烟草中RDRP和PVX病毒的变化 | 第28-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-53页 |
| ·结果 | 第30-49页 |
| ·重组病毒克隆载体的构建 | 第30页 |
| ·PCR鉴定重组病毒载体 | 第30-31页 |
| ·PCR鉴定重组病毒载体转化农杆菌MOG101 | 第31-32页 |
| ·重组病毒载体侵染烟草中重组病毒的表达规律 | 第32-36页 |
| ·重组病毒载体侵染烟草的表型观察 | 第36-41页 |
| ·Real—time PCR鉴定重组病毒侵染烟草γ-tubulin基因转录水平的变化 | 第41页 |
| ·电子扫描显微镜观察γ-tubulin基因沉默烟草叶片 | 第41-42页 |
| ·徒手切片观察γ-tubulin基因沉默烟草叶片 | 第42-43页 |
| ·γ-tubulin基因沉默烟草叶片保卫细胞的整体骨架观察 | 第43-44页 |
| ·观察γ-tubulin基因沉默烟草叶片保卫细胞中叶绿体的分布 | 第44-45页 |
| ·免疫荧光标记观察γ-tubulin基因沉默烟草保卫细胞骨架 | 第45-48页 |
| ·γ-tubulin基因沉默烟草花粉活力测定 | 第48页 |
| ·半定量RT—PCR分析γ-tubulin基因沉默烟草叶片中RDRP、PVX的变化 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-53页 |
| ·γ-微管蛋白参与烟草叶片的发育生长 | 第49-50页 |
| ·γ-tubulin基因沉默和重组病毒载体插入片断的丢失 | 第50-51页 |
| ·γ-tubulin不同基因片断所产生的基因沉默效应 | 第51页 |
| ·病毒诱导基因沉默的信号传递 | 第51-53页 |
| 第四章 小结和展望 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-65页 |
| 硕士期间发表文章 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
