| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-13页 |
| ·1,3-丙二醇的工业应用和生产 | 第9-10页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的关键酶 | 第10-11页 |
| ·Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶及其激活因子的研究意义 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-22页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·酶与试剂 | 第13-14页 |
| ·主要仪器设备 | 第14页 |
| ·方法与步骤 | 第14-22页 |
| ·L.diolivorans的培养 | 第14-15页 |
| ·酶的提取和纯化 | 第15页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶的纯化 | 第15页 |
| ·gldGH表达产物的纯化 | 第15页 |
| ·酶活力的检测 | 第15-16页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶活力的检测 | 第15-16页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶激活因子活力的检测 | 第16页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第16页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第16-17页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第17-18页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶基因(gldCDE)与其激活因子基因(gldGH)的克隆表达 | 第18-22页 |
| ·L.diolivorans基因组DNA的制备 | 第18页 |
| ·gldCDE基因与gldGH基因的引物设计和PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第19-20页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第20-21页 |
| ·连接产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第21页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第21页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与分析 | 第22-34页 |
| ·天然菌中L.diolivorans二醇脱水酶的纯化与性质测定 | 第22-26页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶的纯化 | 第22-24页 |
| ·二醇脱水酶的酶学特性 | 第24-26页 |
| ·pH值对酶反应活力的影响 | 第24页 |
| ·温度对酶反应活力的影响 | 第24-25页 |
| ·酶反应动力学 | 第25-26页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶基因(gldCDE)的克隆表达 | 第26-29页 |
| ·二醇脱水酶基因(gldCDE)表达质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·gldCDE基因的序列分析 | 第28页 |
| ·gldCDE基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| ·重组菌中二醇脱水酶活力的测定 | 第29页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶激活因子基因(gldGH)的克隆表达 | 第29-34页 |
| ·用简并引物扩增gldGH基因全序列 | 第29-30页 |
| ·gldGH基因的全序列分析 | 第30页 |
| ·表达质粒pSE-gldGH的构建 | 第30-32页 |
| ·gldGH基因表达产物的PAGE分析 | 第32页 |
| ·gldGH基因表达产物的酶功能检验 | 第32-34页 |
| 第四章 讨论 | 第34-38页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶 | 第34-35页 |
| ·L.diolivorans二醇脱水酶激活因子 | 第35-38页 |
| 第五章 结论与展望 | 第38-40页 |
| ·结论 | 第38页 |
| ·问题与展望 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录 | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第52页 |
