| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-43页 |
| ·研究问题的由来及意义 | 第14-16页 |
| ·木聚糖酶的研究进展 | 第16-31页 |
| ·木聚糖的结构 | 第16-17页 |
| ·木聚糖的酶解与木聚糖酶的作用机制 | 第17-18页 |
| ·木聚糖酶的酶学性质 | 第18-21页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第21-23页 |
| ·木聚糖酶基因的异源表达 | 第23-24页 |
| ·木聚糖酶基因的定点诱变 | 第24-26页 |
| ·木聚糖酶的分子进化 | 第26-28页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第28-31页 |
| ·木聚糖酶的研究趋势 | 第31页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第31-41页 |
| ·载体的发展 | 第32-33页 |
| ·受体菌 | 第33-34页 |
| ·转化方式 | 第34页 |
| ·整合方式 | 第34页 |
| ·获得高拷贝数整合转化子的方法 | 第34-35页 |
| ·温度对毕赤酵母表达的影响 | 第35页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达菌株的培养条件 | 第35页 |
| ·毕赤酵母的糖基化 | 第35-41页 |
| ·本研究的目的 | 第41-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-60页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第43-48页 |
| ·实验菌株 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·质粒 | 第44-45页 |
| ·引物 | 第45-46页 |
| ·酶和试剂 | 第46页 |
| ·仪器和设备 | 第46-47页 |
| ·主要缓冲液 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-60页 |
| ·细菌总 DNA的抽提 | 第48页 |
| ·真菌总 DNA的抽提 | 第48-49页 |
| ·环境微生物总 DNA的抽提 | 第49页 |
| ·真菌总 RNA的抽提 | 第49-50页 |
| ·质粒 DNA的抽提 | 第50页 |
| ·亚精胺法纯化 DNA | 第50页 |
| ·凝胶回收目的 DNA片段 | 第50-51页 |
| ·溶液回收目的 DNA片段 | 第51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第51页 |
| ·基因组文库的构建 | 第51-52页 |
| ·亚克隆的获得 | 第52页 |
| ·大肠杆菌重组子的筛选 | 第52页 |
| ·序列分析 | 第52页 |
| ·基因组步行 PCR(Genome walking PCR) | 第52-53页 |
| ·RY-PCR扩增cDNA | 第53-54页 |
| ·木聚糖酶毕赤酵母表达载体的构建与验证 | 第54页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第54页 |
| ·重组毕赤酵母在底物平板上的诱导表达 | 第54页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的高密度诱导表达 | 第54-55页 |
| ·HBP8木聚糖酶的纯化 | 第55页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| ·DpnI介导的糖基化位点的定点诱变 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第55-56页 |
| ·活性 PAGE电泳检测表达木聚糖酶的活性 | 第56-57页 |
| ·酶的去糖基化处理 | 第57页 |
| ·酶解液中还原糖含量的测定(DNS法) | 第57-58页 |
| ·木聚糖酶酶活力单位的定义及酶活力的测定 | 第58页 |
| ·酶反应最适pH的测定 | 第58-59页 |
| ·酶动力学常数 K_m、V_(max)的测定 | 第59页 |
| ·金属离子和有机溶剂对酶活性的影响 | 第59页 |
| ·玉米芯木聚糖的制备 | 第59页 |
| ·蔗渣木聚糖的制备 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-95页 |
| ·短小芽孢杆菌 HBP8木聚糖酶基因的克隆、表达及糖基化对热稳定性的影响 | 第60-72页 |
| ·菌株 HBP8的分离与鉴定 | 第60页 |
| ·B.pumilus HBP8基因组文库的构建及阳性克隆的筛选 | 第60页 |
| ·序列分析 | 第60页 |
| ·XynHB推测氨基酸序列的特征 | 第60-63页 |
| ·木聚糖酶xynHB基因毕赤酵母表达质粒的构建 | 第63-64页 |
| ·P.pastoris转化子的获得和温度对木聚糖酶表达的影响 | 第64页 |
| ·木聚糖酶 XynHB的纯化和活性电泳分析 | 第64-65页 |
| ·重组木聚糖酶 XynHB的去糖基化处理 | 第65-66页 |
| ·木聚糖酶 XynHB酶学性质的研究 | 第66-69页 |
| ·木聚糖酶基因xynHB的定点诱变 | 第69页 |
| ·木聚糖酶基因xynHB突变体在毕赤酵母的表达 | 第69-70页 |
| ·毕赤酵母表达的木聚糖酶基因突变体温度敏感性的研究 | 第70-72页 |
| ·食线虫真菌 Plectosphaerella cucumerina木聚糖酶基因xynZG的克隆、表达及酶学性质研究 | 第72-82页 |
| ·P.cucumerina木聚糖酶基因片段的获得 | 第72页 |
| ·所分离产木聚糖酶真菌的菌种鉴定 | 第72页 |
| ·P.cucumerina木聚糖酶基因全长序列和cDNA的克隆 | 第72-73页 |
| ·推测蛋白的特征 | 第73-76页 |
| ·木聚糖酶基因xynZG毕赤酵母表达质粒的构建 | 第76-77页 |
| ·P. pastoris转化子的获得和温度对木聚糖酶表达的影响 | 第77页 |
| ·木聚糖酶 XYNZG的纯化 | 第77-78页 |
| ·木聚糖酶 XYNZG酶学性质的研究 | 第78-82页 |
| ·棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae木聚糖酶基因xynG的克隆、表达和酶学性质分析 | 第82-91页 |
| ·木聚糖酶基因片段的获得 | 第82页 |
| ·棉花黄萎病真菌的菌种鉴定 | 第82页 |
| ·GWPCR法克隆木聚糖酶基因的全长序列 | 第82-83页 |
| ·木聚糖酶基因的序列分析 | 第83-85页 |
| ·木聚糖酶基因cDNA的获得 | 第85页 |
| ·推测氨基酸的序列分析 | 第85-87页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第87页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第87-88页 |
| ·重组酶 XYNG的诱导表达、纯化和酶学性质研究 | 第88-91页 |
| ·土壤微生物 DNA木聚糖酶基因多样性的研究 | 第91-95页 |
| ·土壤微生物 DNA的抽提与木聚糖酶基因片段的扩增效果 | 第91页 |
| ·重组克隆的获得与鉴定结果 | 第91-92页 |
| ·所得片段的序列分析 | 第92-93页 |
| ·木聚糖酶片段的同源性比较 | 第93-95页 |
| 4 讨论 | 第95-102页 |
| ·木聚糖酶基因资源的开发 | 第95-97页 |
| ·细菌来源 | 第95页 |
| ·真菌来源 | 第95-97页 |
| ·环境微生物来源 | 第97页 |
| ·木聚糖酶基因在毕赤酵母的表达 | 第97-99页 |
| ·表达载体的构建 | 第98页 |
| ·培养温度对表达的影响 | 第98页 |
| ·糖基化对表达的影响 | 第98-99页 |
| ·木聚糖酶的酶学性质 | 第99-100页 |
| ·土壤微生物木聚糖酶基因的多样性 | 第100-102页 |
| 参考文献(References) | 第102-121页 |
| 个人简历 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
