油菜赤霉素代谢关键酶基因的分离及其功能分析
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-38页 |
| 1 文献综述 | 第11-35页 |
| ·油菜的遗传转化 | 第11-22页 |
| ·油菜转基因研究进展 | 第11-15页 |
| ·油菜籽的品质改良 | 第11-14页 |
| ·油菜抗逆性遗传改良 | 第14-15页 |
| ·油菜雄性不育的遗传改良 | 第15页 |
| ·转基因油菜作为反应器的的利用 | 第15页 |
| ·油菜的抗衰老遗传改良 | 第15页 |
| ·油菜转基因的技术体系 | 第15-16页 |
| ·油菜转基因受体系统 | 第15页 |
| ·油菜转基因常用方法 | 第15-16页 |
| ·受体系统与常见转化方法的缺点 | 第16页 |
| ·农杆菌介导的油菜转化的研究 | 第16-20页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化机理 | 第16-17页 |
| ·影响转化频率的主要因素 | 第17-20页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第20页 |
| ·芸薹属植物转基因的遗传与表达 | 第20页 |
| ·国内外主要研究现状 | 第20-21页 |
| ·存在的主要问题及展望 | 第21-22页 |
| ·赤霉素的合成、代谢及调控 | 第22-35页 |
| ·赤霉素的生物合成及分解代谢 | 第23-25页 |
| ·GA生物合成及降解的调控 | 第25-30页 |
| ·赤霉素生物合成、分解及运输的发育调控 | 第25-27页 |
| ·发育阶段对GA生物合成的调节 | 第27页 |
| ·具有生物活性GA_S的水平对GA生物合成的调节 | 第27页 |
| ·光信号对GA生物合成的调节 | 第27-29页 |
| ·温度对GA生物合成的调节 | 第29页 |
| ·其它激素信号对GA生物合成和降解的调节 | 第29-30页 |
| ·合成赤霉素的关键酶及其基因 | 第30-31页 |
| ·赤霉素的信号转导 | 第31-34页 |
| ·GA反应突变体 | 第31页 |
| ·GA反应途径的主要组分 | 第31-33页 |
| ·GA应答途径对GA合成及分解的反馈调控 | 第33-34页 |
| ·赤霉素与杂种优势的关系 | 第34-35页 |
| 2 研究背景、目的和意义 | 第35-36页 |
| 3 实验设计 | 第36-38页 |
| 第二章 赤霉素代谢关键酶基因的分离 | 第38-56页 |
| 1 材料和方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·油菜 | 第38页 |
| ·菌种 | 第38页 |
| ·载体 | 第38页 |
| ·工具酶和修饰酶 | 第38页 |
| ·化学试剂 | 第38-39页 |
| ·试剂盒 | 第39页 |
| ·引物 | 第39页 |
| ·测序 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·油菜材料的处理 | 第39页 |
| ·目的基因引物的设计方法 | 第39页 |
| ·植物材料总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·准备工作 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR | 第40-41页 |
| ·反转录 | 第40页 |
| ·PCR获得目的基因 | 第40-41页 |
| ·目的基因PCR产物的纯化回收 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化(电击法) | 第41-42页 |
| ·培养基及试剂的配制 | 第41页 |
| ·操作步骤 | 第41-42页 |
| ·目的基因与pGEM T-easy载体相连 | 第42页 |
| ·酶连体系的转化 | 第42页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第42页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱裂解法) | 第42页 |
| ·溶液的配置 | 第42页 |
| ·操作步骤 | 第42页 |
| ·基因组DNA提取操作步骤 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-55页 |
| ·目的基因的获得 | 第43-44页 |
| ·目的基因序列 | 第44-47页 |
| ·目的基因的序列分析 | 第47-55页 |
| ·BnGA3ox1的序列分析 | 第47-50页 |
| ·BnGA3ox2的序列分析 | 第50-52页 |
| ·BnGA20ox1的序列分析 | 第52-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 第三章 赤霉素代谢关键酶基因的遗传转化及功能分析 | 第56-83页 |
| 1 材料和方法 | 第56-64页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·油菜 | 第56页 |
| ·菌种 | 第56页 |
| ·载体 | 第56页 |
| ·工具酶和修饰酶 | 第56页 |
| ·化学试剂 | 第56页 |
| ·测序 | 第56页 |
| ·试剂盒 | 第56页 |
| ·MS基本培养基 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-64页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第58-60页 |
| ·转基因植株的检测 | 第60-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-83页 |
| ·烟草的遗传转化及分析 | 第70-76页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第70-72页 |
| ·转基因烟草的形态 | 第72页 |
| ·烟草赤霉素的测定 | 第72页 |
| ·Northern blotting | 第72-76页 |
| ·油菜的遗传转化 | 第76-80页 |
| ·筛选培养基中抗生素浓度的确定 | 第76页 |
| ·油菜转基因植株的获得 | 第76-78页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| ·关于基因的功能 | 第80-81页 |
| ·关于油菜的遗传转化 | 第81-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 附录 | 第95页 |
