| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 一、文献综述 | 第7-21页 |
| 1 植物耐旱的生理、生化机制 | 第7-9页 |
| 2 植物耐旱的分子响应 | 第9-18页 |
| ·水分胁迫诱导表达基因产物的功能 | 第9-13页 |
| ·调控蛋白 | 第9-10页 |
| ·功能蛋白 | 第10-13页 |
| ·水分胁迫应答基因的表达调控 | 第13-17页 |
| ·启动子 | 第13-14页 |
| ·转录水平调控 | 第14-16页 |
| ·依赖 ABA且需要蛋白质合成的的诱导基因表达途径(Ⅰ) | 第14-15页 |
| ·依赖 ABA且不需要蛋白质合成的的诱导基因表达途径(Ⅱ) | 第15页 |
| ·不依赖 ABA的诱导基因表达途径(Ⅲ、Ⅳ) | 第15-16页 |
| ·转录后水平调控 | 第16页 |
| ·水分胁迫的信号转导 | 第16-17页 |
| ·玉米水分胁迫应答基因的研究状况 | 第17-18页 |
| 3 抑制差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization)技术 | 第18-20页 |
| ·抑制差减杂交技术的原理和实验程序 | 第18-19页 |
| ·抑制差减杂交技术的优点与缺陷 | 第19页 |
| ·抑制差减杂交技术对玉米中差异表达基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 4 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 二、材料与方法 | 第21-35页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·载体、菌株与抗生素 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·分析软件 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-35页 |
| ·总 RNA提取 | 第22-23页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第23-24页 |
| ·抑制消减杂交 | 第24-28页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第24-25页 |
| ·双链cDNA的 Rsa Ⅰ酶切 | 第25页 |
| ·接头连接 | 第25-26页 |
| ·第一轮杂交 | 第26页 |
| ·第二轮杂交 | 第26-27页 |
| ·第一轮 PCR扩增 | 第27页 |
| ·第二轮 PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·差减后cDNA产物的克隆 | 第28-29页 |
| ·反式 Northern杂交 | 第29-34页 |
| ·主要溶液、缓冲液 | 第29页 |
| ·消减克隆斑点印迹膜制备 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增差减克隆中的cDNA插入片段 | 第29-30页 |
| ·cDNA斑点印迹膜制备 | 第30页 |
| ·地高辛标记cDNA探针 | 第30-33页 |
| ·总 RNA反转录为cDNA探针 | 第30-31页 |
| ·探针标记 | 第31-32页 |
| ·标记探针的定量 | 第32-33页 |
| ·杂交 | 第33页 |
| ·预杂交 | 第33页 |
| ·杂交 | 第33页 |
| ·杂交结果检测 | 第33-34页 |
| ·序列测定分析和基因功能预测 | 第34-35页 |
| 三、结果与分析 | 第35-43页 |
| 1 总 RNA和mRNA的质量 | 第35-36页 |
| 2 cDNA合成及 Rsa I酶切效率分析 | 第36页 |
| 3 正向差减后的cDNA | 第36-37页 |
| ·正向差减两轮 PCR产物 | 第36-37页 |
| ·正向差减cDNA的克隆 | 第37页 |
| 4 反式 Northern鉴定的特异表达cDNA | 第37-39页 |
| ·标记探针的定量 | 第37-38页 |
| ·鉴定的特异表达cDNA | 第38-39页 |
| 5 测序结果及相似性分析 | 第39-43页 |
| ·B1片段 | 第39-40页 |
| ·A2片段 | 第40-41页 |
| ·C4片段 | 第41-42页 |
| ·E4片段 | 第42页 |
| ·F4片段 | 第42-43页 |
| 四、讨论 | 第43-47页 |
| 1 玉米对干旱胁迫的应答 | 第43-44页 |
| 2 RNA的制备与纯化 | 第44-45页 |
| 3 差异片段的克隆 | 第45-46页 |
| 4 反式 Northern杂交 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第54页 |
