| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1 反义技术在新型抗菌药物研发中的应用 | 第11-17页 |
| ·原核生物中常用的反义技术 | 第12-13页 |
| ·反义技术在抗菌药物新靶点发现和验证中的应用 | 第13-15页 |
| ·反义技术在建立抗菌药物新筛选模型中的应用 | 第15-17页 |
| 2 FabI 作为抗菌靶点的优越性 | 第17-19页 |
| ·FabI 的催化机制和生化特性 | 第17-18页 |
| ·已发现的FabI 抑制剂及其作用机制 | 第18-19页 |
| 3 植物内生真菌及其代谢产物的概述 | 第19-24页 |
| ·植物内生真菌的概念及种类 | 第19-20页 |
| ·植物内生真菌的研究进展 | 第20-21页 |
| ·植物内生真菌代谢产物的多样性 | 第21-24页 |
| ·植物生长调节类物质 | 第21页 |
| ·杀虫物质 | 第21-22页 |
| ·抑菌物质 | 第22页 |
| ·抗肿瘤类物质 | 第22-23页 |
| ·抗病毒类物质 | 第23-24页 |
| ·其他类型的代谢产物 | 第24页 |
| 4 立题依据 | 第24-26页 |
| 第二章 FabI 抑制剂筛选模型的建立及活性筛选 | 第26-46页 |
| 1 实验材料 | 第26-29页 |
| ·主要试剂和酶 | 第26-27页 |
| ·质粒和菌种 | 第27-28页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第28页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-36页 |
| ·fabI 反义基因的获得和工程菌的构建 | 第29-35页 |
| ·E.coli 总DNA 的提取 | 第30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第31页 |
| ·PCR 产物的电泳鉴定 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第32页 |
| ·连接和转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的提取与酶切验证 | 第33-34页 |
| ·基因沉默对不同宿主生长的影响 | 第34页 |
| ·工程菌E.coli TOP10/pHNF 的敏感性验证 | 第34-35页 |
| ·FabI 抑制剂模型筛选方法的建立 | 第35-36页 |
| ·IPTG 浓度的确定 | 第35-36页 |
| ·筛选方法的验证 | 第36页 |
| 3 实验结果 | 第36-44页 |
| ·反义基因的获得和工程菌的构建 | 第36-40页 |
| ·E.coli DH5α总DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·fabI 反义基因片段的扩增 | 第37页 |
| ·pHN678-FabI 重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·工程菌的检验 | 第38-40页 |
| ·FabI 抑制模型筛选条件的确定 | 第40-43页 |
| ·IPTG 浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·筛选方法的验证 | 第41-43页 |
| ·FabI 抑制模型活性筛选 | 第43-44页 |
| ·样品筛选步骤 | 第43-44页 |
| ·筛选结果 | 第44页 |
| 4 本章小结和讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 植物内生真菌 HCCB06314 的鉴定 | 第46-54页 |
| 1 实验材料 | 第46-48页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·仪器和设备 | 第46页 |
| ·药品和试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·斜面培养基(%) | 第47页 |
| ·鉴定培养基 | 第47-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-50页 |
| ·菌株的形态学鉴定 | 第48页 |
| ·菌株的分子生物学鉴定 | 第48-50页 |
| ·染色体DNA 的提取 | 第48页 |
| ·PCR 扩增引物的合成 | 第48-49页 |
| ·ITS 序列PCR 扩增体系 | 第49页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第49-50页 |
| ·系统发育分析 | 第50页 |
| 3 实验结果和讨论 | 第50-53页 |
| ·菌株的形态鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·分子生物学鉴定结果 | 第51-53页 |
| ·ITS 序列的PCR 结果 | 第51-52页 |
| ·系统发育分析 | 第52-53页 |
| ·鉴定结果 | 第53页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 植物内生真菌HCCB06314 代谢产物的分离纯化和结构鉴定 | 第54-66页 |
| 1 实验材料 | 第54-57页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·仪器和设备 | 第54-55页 |
| ·药品和试剂 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| 2 实验方法 | 第57-59页 |
| ·菌株HCCB06314 代谢产物的分离纯化 | 第57-58页 |
| ·HCCB06314 大米固体发酵 | 第57页 |
| ·发酵产物的预处理 | 第57页 |
| ·硅胶层析柱减压分离纯化 | 第57-58页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC)分析检测样品 | 第58页 |
| ·HCCB06314 代谢产物的理化性质和结构鉴定 | 第58-59页 |
| ·HCCB06314 代谢产物的活性检测 | 第59页 |
| 3 实验结果和讨论 | 第59-65页 |
| ·HCCB06314 代谢产物的理化性质和结构鉴定 | 第59-64页 |
| ·化合物 HCCB06314-1 的结构解析 | 第59-61页 |
| ·化合物 HCCB06314-2 的结构解析 | 第61-62页 |
| ·其它化合物的结构解析 | 第62-64页 |
| ·化合物 HCCB06314-1 和 HCCB06314-2 的活性检测 | 第64-65页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第65-66页 |
| 全文总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-83页 |
| 1.初筛得到的阳性样品 | 第72-75页 |
| 2.HCCB06314-1(6314-8-4)的相关谱图 | 第75-81页 |
| 3.HCCB06314-2(6314-10-9)的相关谱图 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
