| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 符号说明 | 第19-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-32页 |
| 1 哮喘病理机制 | 第22-26页 |
| 1．1 Th1/Th2失衡 | 第22-23页 |
| 1．2 IL-4与哮喘 | 第23-24页 |
| 1．3 IL-5与哮喘 | 第24-25页 |
| 1．4 IgE与哮喘 | 第25页 |
| 1．5 CD23与哮喘 | 第25-26页 |
| 1．6 NF-κB与哮喘 | 第26页 |
| 2 肝素与哮喘的防治 | 第26-30页 |
| 2．1 肝素与 IL-4 | 第27-28页 |
| 2．2 肝素与 IL-5 | 第28-29页 |
| 2．3 肝素与 IgD | 第29页 |
| 2．4 肝素与 NF-κB | 第29-30页 |
| 3 本课题已有的研究基础 | 第30页 |
| 4 本课题拟解决的问题 | 第30-32页 |
| 第二章 肝素寡糖的分离、纯化与筛选 | 第32-47页 |
| 1 材料 | 第32页 |
| 1．1 材料和试剂 | 第32页 |
| 1．2 仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| 2．1 肝素寡糖的分离、纯化 | 第32-33页 |
| 2．1．1 Superdex 30凝胶柱层析分离肝素寡糖 | 第32-33页 |
| 2．1．2 QFF离子交换色谱分离肝素寡糖 | 第33页 |
| 2．1．3 Spherisorb SAX离子交换色谱分离肝素寡糖 | 第33页 |
| 2．2 PAGE筛选肝素寡糖 | 第33-34页 |
| 2．2．1 缓冲液的配制 | 第33-34页 |
| 2．2．2 制胶 | 第34页 |
| 2．2．3 电泳 | 第34页 |
| 2．2．4 染色与脱色 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-45页 |
| 3．1 肝素寡糖分离纯化的结果 | 第34-41页 |
| 3．1．1 Superdex 30分离肝素寡糖的结果 | 第34-36页 |
| 3．1．2 Superdex 30二次分离肝素寡糖的结果 | 第36-37页 |
| 3．1．3 QFF分离肝素寡糖的结果 | 第37-39页 |
| 3．1．4 Spherisorb SAX分离肝素寡糖的结果 | 第39-41页 |
| 3．2 肝素寡糖样品的电泳结果 | 第41-45页 |
| 3．2．1 三种方法降解所得Olig及凝胶分离后的 PAGE电泳结果 | 第41-42页 |
| 3．2．2 亚硝酸降解肝素寡糖样品的 PAGE结果 | 第42-43页 |
| 3．2．3 过氧化氢降解肝素寡糖样品的PAGE结果 | 第43页 |
| 3．2．4 β-消除降解肝素寡糖样品的PAGE结果 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 肝素寡糖的结构研究 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| 1．1 材料与试剂 | 第47页 |
| 1．2 仪器 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| 2．1 肝素寡糖的红外光谱测定 | 第47-48页 |
| 2．2 肝素寡糖核磁共振图谱测定 | 第48页 |
| 2．3 双糖分析 | 第48-49页 |
| 2．3．1 裂解酶的处理 | 第48页 |
| 2．3．2 样品的消化 | 第48页 |
| 2．3．3 HPLC分析 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-55页 |
| 3．1 肝素寡糖红外光谱测定结果 | 第49页 |
| 3．2 肝素寡糖核磁共振图谱分析结果 | 第49-52页 |
| 3．2．1 肝素寡糖~1H-NMR分析结果 | 第50页 |
| 3．2．2 肝素寡糖~(13)C-NMR分析结果 | 第50-52页 |
| 3．3 双糖分析结果 | 第52-55页 |
| 3．3．1 标准品混合物 | 第52页 |
| 3．3．2 肝素寡糖双糖分析结果 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 肝素寡糖对mIL-4和mIL-5分泌的影响 | 第57-71页 |
| 1 材料 | 第57页 |
| 1．1 试剂 | 第57页 |
| 1．2 仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| 2．1 小鼠哮喘模型的建立 | 第57-58页 |
| 2．1．1 实验动物 | 第57页 |
| 2．1．2 实验动物分组 | 第57-58页 |
| 2．1．3 小鼠哮喘模型的复制 | 第58页 |
| 2．2 观察肺组织形态学改变 | 第58页 |
| 2．3 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备和培养 | 第58-59页 |
| 2．4 细胞因子的测定 | 第59-60页 |
| 2．4．1 mIL-4含量测定 | 第59页 |
| 2．4．2 mIL-5含量测定 | 第59-60页 |
| 2．5 统计学方法 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-68页 |
| 3．1 病理 | 第60-62页 |
| 3．2 小鼠脾淋巴细胞培养液mIL-4含量 | 第62-64页 |
| 3．2．1 mIL-4标准曲线的测定 | 第62-63页 |
| 3．2．2 mIL-4的表达水平 | 第63-64页 |
| 3．3 小鼠脾淋巴细胞培养上清液中mIL-5含量测定 | 第64-66页 |
| 3．3．1 mIL-5标准曲线的测定 | 第64-65页 |
| 3．3．2 mIL-5的表达水平 | 第65-66页 |
| 3．4 不同肝素寡糖浓度对mIL-4、mIL-5含量的影响 | 第66-68页 |
| 3．4．1 三种肝素寡糖对mIL-4含量影响测定 | 第66-67页 |
| 3．4．2 三种肝素寡糖对mIL-5含量影响测定 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 肝素寡糖对哮喘相关炎症因子表达的影响 | 第71-86页 |
| 1 材料 | 第71页 |
| 1．1 样品和试剂 | 第71页 |
| 1．2 仪器 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-75页 |
| 2．1 小鼠哮喘模型的建立 | 第71-72页 |
| 2．1．1 实验动物 | 第71页 |
| 2．1．2 实验动物分组 | 第71-72页 |
| 2．1．3 小鼠哮喘模型的复制 | 第72页 |
| 2．1．4 观察肺组织形态学改变 | 第72页 |
| 2．2 脾淋巴细胞悬液的制备和培养 | 第72页 |
| 2．3 哮喘炎症因子活性的测定 | 第72-75页 |
| 2．3．1 脾淋巴细胞培养上清液中mouse IgE含量测定 | 第72-73页 |
| 2．3．2 小鼠脾淋巴细胞 CD23阳性率流式测定 | 第73-74页 |
| 2．3．3 小鼠肺组织 NF-κB p65阳性率测定 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-83页 |
| 3．1 小鼠脾淋巴细胞悬液 IgE测定结果 | 第75-77页 |
| 3．1．1 标准曲线的测定 | 第75页 |
| 3．1．2 小鼠脾淋巴细胞悬液 IgE表达水平 | 第75-77页 |
| 3．2 小鼠脾淋巴细胞 CD23阳性率测定结果 | 第77-80页 |
| 3．2．1 CD23在脾淋巴细胞的表达 | 第77-79页 |
| 3．2．2 CD23阳性率测定结果 | 第79-80页 |
| 3．3 NF-κB p65 的测定 | 第80-83页 |
| 3．3．1 NF-κB p65在小鼠肺组织的表达 | 第80-81页 |
| 3．3．2 NF-κB p65阳性率测定结果 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-84页 |
| 5 小结 | 第84-86页 |
| 第六章 肝素寡糖与细胞因子的结合实验 | 第86-103页 |
| 1 材料 | 第86页 |
| 1．1 试剂 | 第86页 |
| 1．2 仪器 | 第86页 |
| 2 方法 | 第86-88页 |
| 2．1 酶联免疫测定法 | 第86页 |
| 2．1．1 肝素寡糖与细胞因子结合 | 第86页 |
| 2．1．2 细胞因子含量的测定 | 第86页 |
| 2．2 IL-4、IL-5和肝素寡糖的 ATR-FTIR测定 | 第86-88页 |
| 2．2．1 波谱采集 | 第86-87页 |
| 2．2．2 谱图分析 | 第87-88页 |
| 3 结果 | 第88-98页 |
| 3．1 酶联免疫测定肝素寡糖与 IL-4、IL-5含量 | 第88-91页 |
| 3．1．1 肝素寡糖与细胞因子结合最适浓度 | 第88页 |
| 3．1．2 三种肝素寡糖与 IL-4结合测定结果 | 第88-90页 |
| 3．1．3 三种肝素寡糖与 IL-5结合测定结果 | 第90-91页 |
| 3．2 肝素寡糖Olig BH．7与 IL-4、IL-5的 ATR-FTIR测定结果 | 第91-98页 |
| 3．2．1 肝素寡糖Olig BH．7与 IL-4结合 ATR-FTIR测定结果 | 第91-94页 |
| 3．2．2 肝素寡糖Olig BH．7与 IL-5结合 ATR-FTIR测定结果 | 第94-98页 |
| 4 讨论 | 第98-102页 |
| 5 小结 | 第102-103页 |
| 总结 | 第103-105页 |
| 附录 | 第105-115页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第126-127页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第127页 |
