基因失活与基因表达在链霉菌抗生素组分改造过程中的应用
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩写 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-26页 |
| ·棒状链霉菌及其次级代谢产物 | 第10-16页 |
| ·概述 | 第10-11页 |
| ·克拉维酸 | 第11-14页 |
| ·头霉素C | 第14-16页 |
| ·阿维链霉菌及其次级代谢产物 | 第16-22页 |
| ·概述 | 第16页 |
| ·阿维菌素的作用原理和生物学活性 | 第16-18页 |
| ·阿维菌素的生物合成 | 第18-20页 |
| ·阿维菌素生物合成基因簇 | 第20页 |
| ·目前的发展状况 | 第20-22页 |
| ·链霉菌表达系统 | 第22-24页 |
| ·宿主载体系统 | 第22-23页 |
| ·启动子 | 第23页 |
| ·其他 | 第23-24页 |
| ·立题依据 | 第24-26页 |
| ·棒状链霉菌lat-pcbAB基因的失活 | 第24页 |
| ·阿维链霉菌aveC基因的表达 | 第24-25页 |
| ·阿维链霉菌bkd基因的破坏 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-40页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27-29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·溶液 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第31-32页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备和DNA转化 | 第33-34页 |
| ·DNA酶切和连接 | 第34页 |
| ·DNA电泳和凝胶片段回收 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增片段 | 第35-36页 |
| ·接合转移实验及双交换菌株的筛选 | 第36-37页 |
| ·基因阻断菌株产物的提取及检测 | 第37-39页 |
| ·溴化乙锭溶液的处理 | 第39-40页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第40-68页 |
| ·棒状链霉菌lat-pcbAB基因的插入失活 | 第40-52页 |
| ·质粒pSY06的构建 | 第40-43页 |
| ·双交换菌株的挑选 | 第43-45页 |
| ·染色体DNA的PCR检测 | 第45-47页 |
| ·基因置换菌株发酵产物的HPLC分析 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·阿维链霉菌aveC基因的表达 | 第52-63页 |
| ·阿维链霉菌对常用抗生素的天然抗性水平 | 第52页 |
| ·质粒pSY14的构建 | 第52-56页 |
| ·转化菌株的挑选 | 第56页 |
| ·硫链丝菌素诱导表达aveC基因 | 第56页 |
| ·重组菌株发酵产物的HPLC分析 | 第56-59页 |
| ·硫肽类抗生素对启动子PtipA的诱导 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-63页 |
| ·阿维链霉菌bkd基因的插入失活 | 第63-68页 |
| ·bkdAB和bkdF基因片段的获得 | 第64-65页 |
| ·双交换菌株的挑选 | 第65-67页 |
| ·重组菌株发酵产物的HPLC分析 | 第67-68页 |
| 第四章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
