野大麦盐胁迫诱导基因的克隆及功能分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-30页 |
| 1 植物耐盐性分子机制的研究进展 | 第9-25页 |
| ·小分子的渗透调节 | 第9-13页 |
| ·脱落酸 | 第13-14页 |
| ·大分子蛋白 | 第14-16页 |
| ·离子摄人和区域化 | 第16-17页 |
| ·代谢相关的基因克隆 | 第17-19页 |
| ·信号传导 | 第19-21页 |
| ·调控元件 | 第21-25页 |
| 2 抑制性差减杂交技术(SSH)及其研究进展 | 第25-30页 |
| ·SSH技术的基本原理 | 第25页 |
| ·SSH技术的主要过程 | 第25-28页 |
| ·SSH技术的特点评析 | 第28页 |
| ·SSH技术的最新研究进展 | 第28-30页 |
| 第二章 实验设计 | 第30-32页 |
| 1 立题意义 | 第30-31页 |
| 2 技术路线 | 第31-32页 |
| 第三章 材料与方法 | 第32-48页 |
| 1 材料 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-48页 |
| ·盐胁迫处理 | 第32页 |
| ·RNA提取 | 第32-33页 |
| ·cDNA的合成 | 第33-34页 |
| ·双链cDNA的纯化 | 第34-35页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切 | 第35-36页 |
| ·酶切cDNA产物的纯化 | 第36页 |
| ·接头的连接 | 第36-37页 |
| ·第一次杂交 | 第37页 |
| ·第二次杂交 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR产物的连接转化 | 第39-41页 |
| ·差减差异片段cDNA文库的构建 | 第41页 |
| ·质粒的提取 | 第41-42页 |
| ·酶切检验 | 第42页 |
| ·PCR扩增克隆的插入片段 | 第42-43页 |
| ·反向Northern点杂交 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的序列测定 | 第44页 |
| ·RACE获得全长cDNA | 第44-47页 |
| ·生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 第四章 结果与分析 | 第48-65页 |
| 1 RNA的提取 | 第48-49页 |
| 2 双链cDNA的合成 | 第49-50页 |
| 3 抑制性差减杂交结果 | 第50页 |
| 4 差减杂交效率检测 | 第50页 |
| 5 差减片段文库和PCR扩增插入片段 | 第50-51页 |
| 6 反向Northern Bloting筛选克隆 | 第51-52页 |
| 7 RACE获得全长cDNA | 第52-53页 |
| 8 生物信息学分析 | 第53-65页 |
| ·EST功能分析 | 第53-60页 |
| ·全长cDNA生物学分析 | 第60-65页 |
| 第五章 讨论 | 第65-68页 |
| 1 抑制性差减杂交的利用 | 第65页 |
| 2 对植物耐盐胁迫生物学机理的探讨 | 第65-67页 |
| 3 全长基因BST16与植物耐盐性 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
