| 1 前言 | 第1-26页 |
| ·植物冻害与抗冻机理 | 第10-18页 |
| ·细胞膜系与植物抗寒冻性 | 第11-12页 |
| ·酶系统多态性与植物抗寒冻性 | 第12页 |
| ·忍受胞外结冰与避免细胞内结冰 | 第12-13页 |
| ·抗冻基因的表达及其调节因子 | 第13-15页 |
| ·抗冻蛋白 | 第15-18页 |
| ·鱼类抗冻蛋白 | 第15-16页 |
| ·植物抗冻蛋白 | 第16-18页 |
| ·抗冻蛋白在植物抗冻生理中的作用 | 第18页 |
| ·植物基因工程研究的方法 | 第18-22页 |
| ·基因的克隆与分离 | 第18-19页 |
| ·基因的修饰 | 第19-20页 |
| ·植物转基因技术 | 第20-22页 |
| ·转基因植株的筛选与检测 | 第22页 |
| ·转基因杨树的研究概况 | 第22-24页 |
| ·本项目研究的立题依据及目的意义 | 第24-26页 |
| 2 胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及载体的构建 | 第26-43页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·试剂与仪器 | 第26-28页 |
| ·方法 | 第28-37页 |
| ·胡萝卜RNA的提取与检测 | 第28-29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第29-30页 |
| ·逆转录反应 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·目的片段PCR产物的回收 | 第30-31页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·目的基因片段与克隆载体T载体的连接 | 第31页 |
| ·克隆载体向大肠杆菌的转化 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·抗冻蛋白基因植物表达载体的构建 | 第33-37页 |
| ·PBI-AFP的PCR鉴定 | 第34页 |
| ·PBI-AFP的酶切检测 | 第34页 |
| ·根癌农杆菌EHA105电转化感受态细胞的制备 | 第34-37页 |
| ·利用电转化法将PBI-AFP导入农杆菌 | 第37页 |
| ·工程菌的鉴定 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第37-38页 |
| ·目的基因的克隆结果 | 第38-40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·目的片段的DNA序列分析 | 第38-40页 |
| ·PBI-AFP植物表达载体的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·PBI-AFP向农杆菌EHA105的导入及工程菌的鉴定 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·影响RT-PCR的因素 | 第41-42页 |
| ·PCR产物克隆策略 | 第42页 |
| ·农杆菌的直接转化法 | 第42-43页 |
| ·关于转化农杆菌的鉴定方法 | 第43页 |
| ·小结 | 第43页 |
| 3 农杆菌介导法转化烟草 | 第43-47页 |
| ·材料与方法 | 第43-46页 |
| ·试材 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·培养基及激素的配制 | 第44页 |
| ·无菌苗的继代培养 | 第44页 |
| ·转化叶片处理及农杆菌侵染 | 第44-45页 |
| ·抗性芽的筛选及转基因植株在卡那霉素中的生根培养 | 第45页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-47页 |
| ·烟草转化芽的获得及卡那霉素抗性分析 | 第46-47页 |
| ·转AFP基因烟草的PCR检测 | 第47页 |
| ·小结 | 第47页 |
| 4 山杨叶片再生体系的建立及遗传转化研究 | 第47-63页 |
| ·试材 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·山杨叶片再生体系的建立 | 第48页 |
| ·卡那霉素敏感性测定 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-60页 |
| ·山杨叶片再生体系的建立 | 第50-53页 |
| ·最佳激素浓度、最适基础培养基的确立 | 第50-52页 |
| ·不同琼脂浓度对叶片分化的影响 | 第52-53页 |
| ·不同蔗糖浓度对叶片分化的影响 | 第53页 |
| ·卡那霉素敏感性测定结果 | 第53-55页 |
| ·叶片分化的卡那霉素敏感性试验 | 第53-54页 |
| ·生根的卡那霉素敏感性试验 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导的抗冻蛋白基因转化 | 第55-60页 |
| ·外植体状态对转化的影响 | 第55页 |
| ·预培养时间对转化效果的影响 | 第55-56页 |
| ·菌液浓度与转化率的关系 | 第56-57页 |
| ·侵染时间与转化率的关系 | 第57页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第57-58页 |
| ·抗性芽的筛选 | 第58-59页 |
| ·转基因山杨的PCR检测 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·山杨叶片再生系统的建立 | 第60-61页 |
| ·提高农杆菌介导法的遗传转化率 | 第61-63页 |
| ·外植体类型 | 第61页 |
| ·培养基PH值与培养温度 | 第61-62页 |
| ·预培养时间 | 第62页 |
| ·脱菌的重要性 | 第62页 |
| ·灵活使用卡那霉素 | 第62-63页 |
| ·提高转化率的其他途径 | 第63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 6 下一步的研究设想 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附图 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |