| 1 摘要 | 第1-11页 |
| 2 前言 | 第11-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-42页 |
| ·材料 | 第15-23页 |
| ·菌株与细胞株 | 第15页 |
| ·组织 | 第15-16页 |
| ·质粒载体 | 第16页 |
| ·工具酶 | 第16-17页 |
| ·PCR引物 | 第17-19页 |
| ·主要试剂 | 第19-21页 |
| ·主要器材和主要仪器 | 第21-22页 |
| ·相关的计算机软件： | 第22-23页 |
| ·技术方案 | 第23-25页 |
| ·Na(+)-K(+)-Exchanging ATPase α 1亚基基因 | 第23页 |
| ·人心钠素(hANP)基因编码区和5'调控区及其与盐敏感高血压之间可能存在的关系的研究 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-42页 |
| ·抗凝外周血白细胞DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·PCR反应 | 第26页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第26-27页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第26-27页 |
| ·碱裂解-PEG沉淀法 | 第27页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第27-28页 |
| ·RNA酶消化法： | 第27-28页 |
| ·氯化锂-PEG沉淀法： | 第28页 |
| ·DNA的限制性酶切分析 | 第28-29页 |
| ·感受态细胞的制备和连接产物的转化 | 第29-31页 |
| ·化学法高效感受态细胞的制备： | 第29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·用于电穿孔法转化的大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·电穿孔法转化： | 第30-31页 |
| ·酶切产物的回收 | 第31页 |
| ·回收DNA片断用Silica的制备 | 第31页 |
| ·酶切产物的电泳回收 | 第31页 |
| ·PCR-SSCP | 第31-32页 |
| ·DNA非变性PAGE胶银染方法 | 第32页 |
| ·DNA手工测序：(非放射性同位素银染法) | 第32-36页 |
| ·测序胶板的制备 | 第32-33页 |
| ·PAGE的配制 | 第33页 |
| ·测序反应步骤 | 第33-35页 |
| ·测序胶的银染显色 | 第35-36页 |
| ·Hela细胞的培养及传代 | 第36-38页 |
| ·Hela细胞的复苏 | 第36页 |
| ·细胞的传代培养 | 第36-37页 |
| ·细胞计数 | 第37页 |
| ·细胞冻存 | 第37-38页 |
| ·脂质体转染Hela细胞 | 第38页 |
| ·细胞的裂解和收获 | 第38-39页 |
| ·细胞瞬时转染结果测定 | 第39页 |
| ·荧光酶(Luciferase)活性测定 | 第39页 |
| ·β-Galactosidase Enzyme活性的测定 | 第39页 |
| ·心肌细胞原代培养物的制备及转染 | 第39-42页 |
| 4 结果 | 第42-92页 |
| ·Na(+)-K(+)-Exchanging ATPase α1亚基基因的研究 | 第42-64页 |
| ·PCR扩增结果 | 第42页 |
| ·限制性酶切分析结果 | 第42-45页 |
| ·测序结果 | 第45-46页 |
| ·序列分析 | 第46-64页 |
| ·内含子剪接位点搜索： | 第46-47页 |
| ·潜在转录因子结合位点搜索： | 第47-62页 |
| ·可能的开放阅读框架(ORF)搜索： | 第62-64页 |
| ·人心钠素(ANP)基因编码区及ANP基因5'调控区的研究 | 第64-92页 |
| ·人心钠素(ANP)基因编码区与盐敏感高血压相关性的初步研究 | 第64-71页 |
| ·盐敏感高血压家系志愿者血样的收集 | 第64-71页 |
| ·DNA样品的PCR扩增及PCR-SSCP检测 | 第71页 |
| ·ANP基因上游调控区段核苷酸异常的发现及其相应的调控作用的研究 | 第71-92页 |
| ·含有人ANP基因5'上游5'调控区系列缺失体的构建 | 第71-83页 |
| ·YJX系列重组报告基因载体转染Hela细胞所测得的荧光酶报告基因表达水平检测结果 | 第83-84页 |
| ·YJX系列重组报告基因载体转染新生Wistar大鼠心房及心肌细胞所测得的荧光酶报告基因表达水平检测结果 | 第84-87页 |
| ·含有与Genbank中报道序列相同的-147位为“GGATG”的重组质粒YJX109m的构建 | 第87-88页 |
| ·质粒YJX109m与YJX109分别转染至Hela细胞和新生Wistar大鼠心房及心室细胞测定的荧光酶报告基因表达水平检测结果 | 第88-92页 |
| 5 讨论 | 第92-115页 |
| ·Na(+)-K(+)-Exchanging ATPase α1亚基基因的研究 | 第92-96页 |
| ·PCR扩增结果 | 第92页 |
| ·限制性酶切分析结果 | 第92-93页 |
| ·测序结果 | 第93-96页 |
| ·人心钠素(ANP)基因编码区及ANP基因5'调控区与盐敏感高血压相关性的初步研究 | 第96-115页 |
| ·人心钠素(ANP)基因编码区的研究 | 第96-99页 |
| ·人心钠素基因5'调控区及特异性序列“GGGATG”对基因表达的影响研究 | 第99-115页 |
| 6 参考文献 | 第115-124页 |
| 7 综述 | 第124-133页 |
| 8 致谢 | 第133页 |
