| 目录（CONTENTS） | 第1-8页 |
| 缩写（ABBREVIATIONS） | 第8-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 前言（INTRODUCTION） | 第15-18页 |
| 文献综述（SUMMARY OF LITERATURE） | 第18-41页 |
| 1． 低温应答 | 第18-30页 |
| 1．1 细菌低温应答研究进展 | 第18-21页 |
| 1．2 植物低温应答研究进展 | 第21-25页 |
| 1．3 植物抗寒基因研究进展 | 第25-27页 |
| 1．4 热带、亚热带果蔬的冷害及贮藏 | 第27-30页 |
| 2． mRNA差异显示技术 | 第30-33页 |
| 2．1 mRNA差异显示法 | 第31-32页 |
| 2．2 mRNA差异显示的发展 | 第32-33页 |
| 3 RACE技术 | 第33-34页 |
| 4． 草菇简介 | 第34-40页 |
| 4．1 草菇营养价值 | 第35-36页 |
| 4．2 草菇生产中存在的问题 | 第36-40页 |
| 5． 研究目的 | 第40-41页 |
| 材料与方法（MATERIALS AND METHODS | 第41-63页 |
| 1． 试验材料 | 第41页 |
| 2． 供试培养基 | 第41页 |
| 3 菌种培养及保存 | 第41-42页 |
| 4． 试验试剂 | 第42-49页 |
| 4．1 蛋白质分离、纯化试剂 | 第42页 |
| 4．2 蛋白酶活性测定试剂 | 第42-43页 |
| 4．3 蛋白质电泳有关试剂 | 第43-45页 |
| 4．4 RNA分离纯化试剂 | 第45页 |
| 4．5 cDNA合成有关试剂 | 第45页 |
| 4．6 mRNA差别显示技术有关试剂 | 第45-47页 |
| 4．7 核酸电泳试剂 | 第47-48页 |
| 4．8 地高辛杂交检测试剂 | 第48-49页 |
| 4．9 质粒提取试剂 | 第49页 |
| 4．10 含DNA的琼脂糖DNA回收试剂 | 第49页 |
| 4．11 PCR产物纯化试剂 | 第49页 |
| 5． 草菇菌丝低温致死时间的测定 | 第49-50页 |
| 6． 低温蛋白酶的分离、纯化及酶活性的测定 | 第50-51页 |
| 6．1 粗酶液的制备 | 第50页 |
| 6．2 硫酸铵分步沉淀 | 第50页 |
| 6．3 Dextran G-150凝胶过滤纯化 | 第50-51页 |
| 6．4 蛋白酶活性测定 | 第51页 |
| 7 草菇低温诱导蛋白的分离与纯化 | 第51-52页 |
| 7．1 可溶性蛋白质粗样品的制备 | 第51-52页 |
| 7．2 可溶性粗蛋白聚丙烯酰胺电泳分析 | 第52页 |
| 7．3 低温诱导蛋白的收集与浓缩 | 第52页 |
| 8． 聚丙烯酰胺电泳 | 第52-56页 |
| 8．1 电泳凝胶制备 | 第52-53页 |
| 8．2 电泳 | 第53页 |
| 8．3 考马斯亮蓝染色 | 第53页 |
| 8．4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第53-54页 |
| 8．5 等电点聚焦凝胶电泳 | 第54-56页 |
| 9． RNA制备 | 第56页 |
| 9．1 采用硫氰酸胍方法提取RNA | 第56页 |
| 9．2 采用总RNA提取试剂盒制备RNA | 第56页 |
| 10． cDNA合成 | 第56-57页 |
| 11． mRNA差异显示技术 | 第57页 |
| 12． 琼脂糖凝胶电泳 | 第57页 |
| 13． 地高辛标记cDNA合成及cDNA真空转移、固定在尼龙膜上 | 第57-58页 |
| 14． PCR扩增 | 第58页 |
| 15． 采用PCR技术对特异扩增带进行非放射性dig-dUTP标记 | 第58-59页 |
| 16． RNA斑点杂交 | 第59页 |
| 17． DIG—标记探针杂交 | 第59页 |
| 18． DIG—标记探显色检测 | 第59-60页 |
| 19． 制备大肠杆菌的感受态细胞 | 第60页 |
| 20． 特异片段与T载体进行连接反应 | 第60-61页 |
| 21． 转化 | 第61页 |
| 22． 克隆快速鉴定 | 第61页 |
| 23． 质粒纯化 | 第61-62页 |
| 24． 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第62页 |
| 25． PCR产物的纯化 | 第62页 |
| 26． DNA序列分析 | 第62-63页 |
| 结果（RESULTS） | 第63-96页 |
| 1． 草菇低温致死时间的测定 | 第63页 |
| 2． 草菇低温蛋白酶分离和纯化 | 第63-65页 |
| 3． 蛋白酶分子量的鉴定 | 第65页 |
| 4． 蛋白酶在不同温度下活性测定结果 | 第65-66页 |
| 5． 低温对草菇菌丝体蛋白质组份的影响 | 第66页 |
| 6． 草菇可溶性蛋白质分析 | 第66-67页 |
| 7． 草菇低温诱导蛋白的鉴定 | 第67-68页 |
| 8． 草菇低温诱导蛋白的等电聚焦 | 第68-70页 |
| 9． 草菇低温诱导蛋白分子量的测定 | 第70-71页 |
| 10． 低温对草菇RNA组份的影响 | 第71-72页 |
| 11． 低温对草菇cDNA组份的影响 | 第72-73页 |
| 12． 采用mRNA差异显示技术分离草菇低温应答基因片段 | 第73-96页 |
| 讨论（DISCUSSIONS） | 第96-104页 |
| 1． 低温对草菇的影响 | 第97页 |
| 2． 草菇蛋白酶在低温下的反应 | 第97-98页 |
| 3． 低温应答最初1-2个小时是研究关键 | 第98-99页 |
| 4． 细胞膜的稳定性与低温的关系 | 第99-100页 |
| 5． 低温应答基因与抗低温的关系 | 第100页 |
| 6． 抑制草菇低温自溶的可能途径 | 第100-104页 |
| 结论（CUNCLUSIONS） | 第104-105页 |
| 致谢（ACKNOWLEDGMENTS） | 第105-107页 |
| 参考文献（LITERATURES） | 第107-114页 |
