| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-41页 |
| 1 犬瘟热研究概况 | 第13-21页 |
| ·病原 | 第13-14页 |
| ·致病机理 | 第14-15页 |
| ·流行病学 | 第15-17页 |
| ·临床症状 | 第17页 |
| ·病理变化 | 第17-18页 |
| ·诊断学 | 第18-19页 |
| ·防治 | 第19-21页 |
| 2 犬瘟热病毒分子生物学特征 | 第21-29页 |
| ·形态学和基因特征 | 第21页 |
| ·病毒蛋白 | 第21-27页 |
| ·前导序列及其调控序列 | 第22页 |
| ·核衣壳蛋白(N)蛋白及其基因 | 第22-24页 |
| ·磷(P)蛋白及其基因 | 第24页 |
| ·基质膜(M)蛋白及其基因 | 第24页 |
| ·大(L)蛋白及其基因 | 第24页 |
| ·融合(F)蛋白及其基因 | 第24-25页 |
| ·附着或血凝(H)蛋白及其基因 | 第25-27页 |
| ·抗原变异性 | 第27-29页 |
| 3 实时荧光定量PCR 研究进展 | 第29-41页 |
| ·实时定量 PCR 原理 | 第29-30页 |
| ·实时定量 PCR 分类 | 第30-33页 |
| ·非探针类 | 第30-31页 |
| ·探针类 | 第31-32页 |
| ·Amplisensor 技术 | 第32页 |
| ·分子信标 | 第32页 |
| ·LightCycler | 第32-33页 |
| ·复合探针法 | 第33页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的特点及优点 | 第33页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的应用 | 第33-36页 |
| ·核酸浓度的定量 | 第33-34页 |
| ·环境检测 | 第34页 |
| ·转基因生物中的应用 | 第34页 |
| ·基因转录的检测 | 第34页 |
| ·生物分类和植物病原物检测 | 第34-35页 |
| ·医学应用 | 第35-36页 |
| ·在兽医学研究领域的应用 | 第36-39页 |
| ·在细菌病诊断中的应用 | 第37页 |
| ·在病毒病诊断中的应用 | 第37-38页 |
| ·在寄生虫病诊断中的应用 | 第38页 |
| ·在其他方面的应用 | 第38-39页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的展望 | 第39-41页 |
| 实验一 CDV-FOX-TA H、F和N基因的克隆与序列分析 | 第41-56页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| ·病毒 | 第41页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第41-42页 |
| ·引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| ·常规DNA 操作技术 | 第43-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第43页 |
| ·连接物的转化 | 第43-44页 |
| ·转化菌落的快速鉴定 | 第44页 |
| ·重组子的酶切筛选与鉴定 | 第44页 |
| ·质粒的小量制备 | 第44-45页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| ·目的片段回收 | 第45页 |
| ·外源DNA 片段与质粒载体的连接反应 | 第45页 |
| ·限制性内切酶水解反应 | 第45-46页 |
| ·病毒总RNA 的提取 | 第46页 |
| ·RT-PCR | 第46页 |
| ·H、F 和 N 基因的克隆与序列分析 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-52页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第47-48页 |
| ·CDV-FOX-TA H、F 和N 基因重组质粒的鉴定 | 第48-50页 |
| ·同源性分析及系统发生树的构建 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-56页 |
| 实验二 TaqMan荧光定量RT-PCR检测CDV方法的建立与初步应用 | 第56-67页 |
| 1 材料与方法 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·引物的设计与合成 | 第57-58页 |
| ·CDV 总RNA 的提取 | 第58页 |
| ·反转录及其反应条件的优化 | 第58页 |
| ·RT-PCR 反应体系的建立及反应条件的优化 | 第58页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 标准阳性模板的制备 | 第58-59页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 反应体系的建立及反应条件的优化 | 第59页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 方法特异性试验 | 第59页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 方法敏感性试验 | 第59-60页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 方法重复性试验及标准曲线的建立 | 第60页 |
| ·犬瘟热病毒 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 检测方法的初步应用 | 第60页 |
| 2 结果 | 第60-65页 |
| ·反转录反应条件的优化结果 | 第60页 |
| ·RT-PCR 反应体系与反应条件 | 第60页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 反应体系及反应条件 | 第60页 |
| ·特异性试验结果 | 第60-61页 |
| ·敏感性实验结果 | 第61-62页 |
| ·重复性试验结果与标准曲线 | 第62-63页 |
| ·犬瘟热病毒 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 检测方法的初步应用结果 | 第63-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历 | 第78页 |
| 攻读硕士期间发表的部分论文 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
