| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| ·DNase Ⅰ简介 | 第12-17页 |
| ·DNase Ⅰ的蛋白质化学与结构 | 第12-13页 |
| ·DNase Ⅰ编码基因及表达 | 第13-15页 |
| ·DNase Ⅰ的功能 | 第15页 |
| ·DNase Ⅰ的临床应用 | 第15-17页 |
| ·DNase Ⅰ的生产方法 | 第17-18页 |
| ·天然提取法 | 第17-18页 |
| ·基因工程方法 | 第18页 |
| ·DNase Ⅰ前景展望 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统简介 | 第19-24页 |
| ·用大肠杆菌进行基因表达的一般策略 | 第19页 |
| ·影响基因重组蛋白质在大肠杆菌中表达的因素 | 第19-21页 |
| ·宿主的选择和培养条件的控制 | 第21页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达形式 | 第21-24页 |
| ·重组蛋白下游纯化技术 | 第24-28页 |
| ·层析方法的选择 | 第24-25页 |
| ·离子交换层析 | 第25页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第25-26页 |
| ·其他方法 | 第26-28页 |
| 第二章 人DNase Ⅰ基因的克隆 | 第28-38页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料与仪器 | 第28-29页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·引物设计及合成 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物回收(试剂盒) | 第31页 |
| ·连接 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·质粒提取(碱裂解法) | 第32-33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33页 |
| ·基因测序鉴定 | 第33页 |
| ·表达载体pET-22b-hDNASE的构建 | 第33-34页 |
| ·结果分析与讨论 | 第34-37页 |
| ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·测序鉴定 | 第35-36页 |
| ·表达载体pET-22b-hDNASE图谱 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组人DNase Ⅰ基因工程菌培养条件的优化 | 第38-52页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·试验材料与仪器 | 第38-39页 |
| ·试验材料 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·菌种活化 | 第39页 |
| ·菌种培养 | 第39-40页 |
| ·不同菌种的选择 | 第40页 |
| ·发酵过程各因素的影响 | 第40-41页 |
| ·培养时间对基因工程菌生长的影响 | 第40页 |
| ·诱导条件的影响 | 第40-41页 |
| ·分析方法 | 第41页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE分析目的蛋白表达量 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-50页 |
| ·不同菌种融合蛋白表达量分析 | 第41-43页 |
| ·基因工程菌的生长 | 第43页 |
| ·不同诱导条件对融合蛋白表达量的影响 | 第43-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第四章 重组人DNase Ⅰ的分离与纯化 | 第52-62页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料和仪器 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验仪器 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)内的分布 | 第53-54页 |
| ·两种诱导条件下重组蛋白的分离与纯化 | 第54-55页 |
| ·LC-ESI-MS/MS鉴定rhDNase Ⅰ | 第55页 |
| ·分析方法 | 第55-56页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第55页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| ·DNase Ⅰ酶活测定 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-59页 |
| ·融合蛋白在菌体中的分布 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第57-58页 |
| ·LC-ESI-MS/MS鉴定rhDNase Ⅰ | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-62页 |
| 第五章 结论与建议 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| ·建议 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 作者和导师简介 | 第75-76页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第76-77页 |