| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-15页 |
| ·miRNA的简介 | 第9页 |
| ·miRNA的发现 | 第9页 |
| ·miRNA的生物合成 | 第9-10页 |
| ·miRNA的作用方式 | 第10-11页 |
| ·miRNA的保守性 | 第11-12页 |
| ·研究背景与思路 | 第12页 |
| ·研究创新点 | 第12-14页 |
| ·技术路线 | 第14-15页 |
| 第二章 一种关于动物肝脏RNA分离方法的改进 | 第15-18页 |
| ·实验材料 青蛙肝脏 | 第15页 |
| ·实验仪器与药品 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-17页 |
| ·实验结果 | 第17-18页 |
| 第三章 miRNA分子的克隆 | 第18-41页 |
| ·实验材料及仪器 | 第18-20页 |
| ·分子生物学实验试剂 | 第18页 |
| ·细菌培养用试剂 | 第18-19页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·其它试剂及试剂盒 | 第19页 |
| ·RNA接头及引物 | 第19-20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·耗材的处理 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-26页 |
| ·实验材料处理 | 第20-21页 |
| ·总RNA提取 | 第21页 |
| ·小RNA分离 | 第21页 |
| ·小RNA分子加Poly(A)尾 | 第21-22页 |
| ·小分子RNA 5'接头连接 | 第22页 |
| ·cDNA的合成 | 第22页 |
| ·PCR扩增反应 | 第22页 |
| ·电泳及目的条带回收 | 第22-23页 |
| ·连接反应 | 第23页 |
| ·制备感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·转化及克隆 | 第24页 |
| ·菌落PCR | 第24页 |
| ·序列测定 | 第24页 |
| ·生物信息学分析 | 第24-25页 |
| ·探针标记 | 第25页 |
| ·转膜和RNA的固定 | 第25页 |
| ·杂交 | 第25-26页 |
| ·NBT/BCIP化学显色法 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-36页 |
| ·总RNA浓度测定及完整性检测 | 第27-28页 |
| ·小RNA的富集 | 第28页 |
| ·PCR电泳图 | 第28-29页 |
| ·菌落PCR鉴定结果 | 第29页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第29-33页 |
| ·Dig-northern blot | 第33-35页 |
| ·RT-PCR检测小RNA在4种动物中的表达 | 第35页 |
| ·克隆得到的序列与miRNA319家族的同源性比较 | 第35-36页 |
| ·已知保守的miRNA在鱼基因组的生物学信息学预测以及实验验证 | 第36-40页 |
| ·在NCBI比对的结果以及二级结构预测 | 第37-39页 |
| ·RT-PCR检测验证 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 所得miRNA分子表达分析及功能预测 | 第41-48页 |
| ·实验材料及仪器 | 第41-43页 |
| ·实验试剂 | 第41-42页 |
| ·其它试剂及试剂盒 | 第42页 |
| ·引物 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·耗材的处理 | 第42页 |
| ·实验材料处理 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·总RNA的提取 | 第43页 |
| ·总RNA分子加Poly(A)尾 | 第43页 |
| ·cDNA合成 | 第43-44页 |
| ·检测miRNA在动物不同状态中的表达 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-47页 |
| ·总RNA浓度及完整性检测 | 第45页 |
| ·检测miRNA在动物中的表达 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 小结与展望 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第48页 |
| ·展望 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 附录 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 发表论文 | 第60页 |