| 提要 | 第1-8页 |
| 英文缩写词表 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-52页 |
| 第一节 Med19 与肿瘤研究进展 | 第13-36页 |
| 1 Med 的发现及其结构 | 第13-16页 |
| ·Med 复合物的发现 | 第13-14页 |
| ·酵母Med 的结构 | 第14-15页 |
| ·哺乳动物的Med | 第15-16页 |
| 2 Med 的功能 | 第16-21页 |
| ·Med 和RNA 聚合酶Ⅱ之间的相互作用 | 第16-17页 |
| ·Med 与转录激活 | 第17-18页 |
| ·Med 与转录阻抑 | 第18-19页 |
| ·Med 对转录进行调节的机制 | 第19-20页 |
| ·Med 复合物在真核生物发育过程中的作用 | 第20-21页 |
| 3 Med19 的功能 | 第21-24页 |
| 4 Med19 与肿瘤 | 第24-25页 |
| 5 Med19 与信号传导基因异常 | 第25-28页 |
| 6 Med19 与代谢类相关基因异常 | 第28-29页 |
| 7 Med19 与蛋白翻译合成类及其他表达差异基因异常 | 第29-30页 |
| 8 细胞转录的分子机制 | 第30-34页 |
| ·原核细胞转录机制的研究 | 第30-31页 |
| ·真核细胞转录机制的研究 | 第31-33页 |
| ·RNA 聚合酶Ⅱ的转录过程 | 第33-34页 |
| 9 Med19 小结与展望 | 第34-36页 |
| 第二节 RNAi 的研究进展 | 第36-52页 |
| 1 RNAi 的研究历史 | 第36-37页 |
| 2 RNA 干扰的作用机制 | 第37-39页 |
| ·转录后抑制 | 第38-39页 |
| ·转录抑制 | 第39页 |
| ·翻译抑制 | 第39页 |
| 3 RNAi 的作用特点 | 第39-41页 |
| ·高度的特异性 | 第39页 |
| ·高效性 | 第39-40页 |
| ·PTGS 机制 | 第40页 |
| ·高稳定性 | 第40页 |
| ·双干扰系统 | 第40页 |
| ·RNAi 的可扩散性 | 第40页 |
| ·抑制范围广 | 第40-41页 |
| ·RNAi 对细胞调控机制的影响 | 第41页 |
| 4 RNAi 技术要点 | 第41-46页 |
| ·siRNA 的设计 | 第41-42页 |
| ·siRNA 的合成 | 第42-43页 |
| ·siRNA 导入细胞的方法 | 第43-46页 |
| 5 RNAi 技术的应用 | 第46-52页 |
| ·基因功能研究 | 第46-47页 |
| ·制备RNAi 转基因动物 | 第47页 |
| ·临床应用 | 第47-52页 |
| 第二章 siRNA-Med19 慢病毒表达载体的构建与鉴定 | 第52-82页 |
| 第一节 材料和方法 | 第53-70页 |
| 1 材料 | 第53-56页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| ·质粒与菌株 | 第55页 |
| ·实验细胞 | 第55页 |
| ·抗体 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-70页 |
| ·siRNA-Med19 慢病毒载体的构建 | 第56-61页 |
| ·目的基因过表达载体构建pCDNA3.1(-)-Med19 | 第61-64页 |
| ·Western Blot 外源筛选有效靶点(protocol) | 第64-67页 |
| ·有效靶点慢病毒大量包装及滴度测定 | 第67-70页 |
| 第二节 实验结果 | 第70-77页 |
| 1 构建的siRNA-Med19 慢病毒载体的鉴定 | 第70-72页 |
| ·酶切pGCSIL-GFP 载体的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第70页 |
| ·构建的siRNA-Med19 慢病毒载体琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第70-71页 |
| ·构建的siRNA-Med19 慢病毒载体测序鉴定 | 第71-72页 |
| 2 目的基因过表达载体pCDNA3.1(-)- Med19 的鉴定 | 第72-75页 |
| 3 Western blot 外源筛选靶点 | 第75-76页 |
| ·慢病毒载体共转染293T 细胞情况 | 第75页 |
| ·最佳靶点筛选情况 | 第75-76页 |
| 4 siRNA-Med19 慢病毒载体的包装及滴度测定 | 第76-77页 |
| 第三节 讨论 | 第77-82页 |
| 第三章 RNAi 沉默Med19 基因对人肺癌A549 细胞影响的体外实验研究 | 第82-105页 |
| 第一节 材料和方法 | 第83-93页 |
| 1 材料 | 第83页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·主要仪器 | 第83页 |
| 2 实验方法 | 第83-93页 |
| ·Real-time PCR 验证靶点的有效性(protocol) | 第83-86页 |
| ·Western blot 验证靶点的有效性(protocol) | 第86-89页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 | 第89-90页 |
| ·细胞生长抑制实验(MTT 比色实验法) | 第90-91页 |
| ·细胞侵袭实验 | 第91-92页 |
| ·细胞克隆形成实验 | 第92页 |
| ·统计学处理 | 第92-93页 |
| 第二节 结果 | 第93-102页 |
| 1 细胞生长状况的观察 | 第93页 |
| 2 Real-time PCR 检测转录影响 | 第93-96页 |
| ·慢病毒载体对人肺癌A549 细胞的感染情况 | 第93-94页 |
| ·Real-time PCR 检测siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞Med19 基因转录的影响 | 第94-96页 |
| 3 Western blot 检测siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞Med19 基因表达的影响 | 第96-97页 |
| 4 siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞生长周期的影响 | 第97-98页 |
| 5 MTT 法检测细胞的增殖抑制 | 第98-99页 |
| 6 siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞侵袭、运动能力的影响 | 第99-101页 |
| 7 细胞克隆形成试验 | 第101-102页 |
| 第三节 讨论 | 第102-105页 |
| 第四章 RNAi 沉默Med19 基因对人肺癌移植瘤生长、转移影响的实验研究 | 第105-118页 |
| 第一节 材料与方法 | 第106-109页 |
| 1 主要材料与来源 | 第106页 |
| 2 实验动物 | 第106页 |
| 3 实验方法 | 第106-109页 |
| ·人肺癌A549 细胞的培养、慢病毒转染及裸鼠肺癌移植瘤模型的建立 | 第106-107页 |
| ·观察项目 | 第107-109页 |
| 第二节 实验结果 | 第109-114页 |
| 1 观察裸鼠移植瘤出瘤时间、大小、称重 | 第109-110页 |
| 2 移植瘤组织HE 染色及荧光示踪 | 第110-111页 |
| 3 移植瘤肺脏转移情况观察 | 第111-112页 |
| 4 移植瘤肝脏转移情况观察 | 第112-114页 |
| 第三节 讨论 | 第114-118页 |
| 第五章 结论 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-134页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 中文摘要 | 第136-140页 |
| Abstract | 第140-145页 |
