| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| ·微生物冶金(Bioleaching) | 第11-12页 |
| ·微生物冶金研究进展 | 第11-12页 |
| ·微生物冶金的主要菌种 | 第12页 |
| ·A.ferrooxidans铁氧化系统介绍 | 第12-14页 |
| ·A.ferrooxidans硫氧化系统介绍 | 第14-19页 |
| ·硫氰酸酶(Rhodanese) | 第19-23页 |
| ·丝氨酸乙酰转移酶(Serine acetyltransferase) | 第23页 |
| ·课题的研究目的与研究内容 | 第23-25页 |
| ·依据和目的 | 第23-24页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第24页 |
| ·论文课题受资助情况 | 第24-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·A.ferrooxidans菌基因组抽提试剂 | 第26页 |
| ·质粒提取试剂 | 第26页 |
| ·不连续体系SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置 | 第27页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第27页 |
| ·酶活测定试剂 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·酶切PCR产物及载体pLM 1 | 第28页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第29-30页 |
| ·蛋白质表达转化 | 第30页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30-31页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第31-32页 |
| ·硫氰酸酶活性测定 | 第32页 |
| ·丝氨酸乙酰转移酶活性测定 | 第32页 |
| ·定点突变 | 第32-33页 |
| ·引物的设计 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33页 |
| ·突变蛋白的表达及纯化 | 第33页 |
| ·测试分析方法 | 第33-35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第33-34页 |
| ·电子顺磁共振(EPR) | 第34-35页 |
| 第三章 硫氰酸酶的克隆、表达、纯化、性质鉴定及定点突变 | 第35-43页 |
| ·硫氰酸酶基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·硫氰酸酶基因的克隆 | 第35页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第35-37页 |
| ·硫氰酸酶的表达 | 第37-40页 |
| ·硫氰酸酶表达条件的确定 | 第37页 |
| ·硫氰酸酶大规模的表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE分析硫氰酸酶 | 第37-38页 |
| ·硫氰酸酶活性测定 | 第38页 |
| ·UV/Vis分析硫氰酸酶 | 第38页 |
| ·电子顺磁共振波谱(EPR)分析硫氰酸酶 | 第38-39页 |
| ·硫氰酸同源性分析 | 第39-40页 |
| ·硫氰酸酶C92、C101、C147、C197、C203定点突变 | 第40-42页 |
| ·硫氰酸酶定点突变 | 第40页 |
| ·突变蛋白的表达、纯化 | 第40页 |
| ·突变蛋白的SDS-PAGE检测 | 第40-41页 |
| ·突变蛋白质的UV/Vis分析 | 第41页 |
| ·突变蛋白的EPR分析 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 丝氨酸乙酰转移酶(Serine acetyltransferase,SAT)的克隆、表达与纯化 | 第43-48页 |
| ·SAT基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·SAT基因的克隆 | 第43页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第43-44页 |
| ·SAT蛋白的表达 | 第44-47页 |
| ·SAT蛋白的表达条件的确定 | 第45页 |
| ·SAT蛋白大规模的表达 | 第45页 |
| ·SAT蛋白纯化样品的SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·SAT酶活测定 | 第45-46页 |
| ·UV/Vis分析SAT蛋白 | 第46页 |
| ·SAT同源性分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第五章 硫氰酸酶在铁硫簇组装中的作用研究 | 第48-53页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·蛋白质 | 第48页 |
| ·Apo-形式蛋白质的准备 | 第48页 |
| ·铁硫簇的组装 | 第48-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第六章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 研究成果 | 第62页 |
