| 缩略语表 | 第9-12页 |
| 中文摘要 | 第12-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 文献回顾 | 第22-35页 |
| 第一部分 胃癌多药耐药细胞侵袭转移相关调控分子的筛选 | 第35-55页 |
| 引言 | 第35页 |
| 1 材料 | 第35-37页 |
| 1.1 细胞系 | 第35页 |
| 1.2 裸鼠 | 第35页 |
| 1.3 其他主要试剂和材料 | 第35-36页 |
| 1.4 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-47页 |
| 2.1 细胞培养 | 第37页 |
| 2.2 siRNA细胞转染 | 第37-38页 |
| 2.3 Transwell实验 | 第38-39页 |
| 2.4 裸鼠尾静脉注射转移实验 | 第39页 |
| 2.5 H&E染色 | 第39页 |
| 2.6 无血清条件培养基收集 | 第39-40页 |
| 2.7 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2.8 胶内酶解 | 第41页 |
| 2.9 纳升液相色谱联合串联质谱分析 | 第41-42页 |
| 2.10 蛋白鉴定 | 第42页 |
| 2.11 生物信息分析预测分泌蛋白 | 第42-43页 |
| 2.12 RNA提取 | 第43页 |
| 2.13 反转录 | 第43-44页 |
| 2.14 Real Time PCR | 第44页 |
| 2.15 蛋白提取 | 第44-45页 |
| 2.16 Western blot | 第45-46页 |
| 2.17 胃癌PDX模型 | 第46页 |
| 2.18 免疫组织化学染色 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-53页 |
| 3.1 胃癌多药耐药细胞侵袭转移能力增强 | 第47-48页 |
| 3.2 胃癌多药耐药细胞分泌蛋白质组学分析及潜在转移相关分子的筛选 | 第48-50页 |
| 3.3 ADAM22在多种肿瘤的耐药细胞表达升高 | 第50-52页 |
| 3.4 多种化疗药物可以诱导胃癌细胞表达ADAM22 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第二部分 ADAM22对胃癌耐药细胞侵袭转移能力的调控 | 第55-60页 |
| 引言 | 第55页 |
| 1 材料 | 第55页 |
| 1.1 细胞系 | 第55页 |
| 1.2 裸鼠 | 第55页 |
| 1.3 siRNA序列 | 第55页 |
| 1.4 其他主要试剂和材料 | 第55页 |
| 1.5 主要仪器 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| 2.1 细胞培养 | 第55页 |
| 2.2 细胞转染 | 第55-56页 |
| 2.3 Transwell实验 | 第56页 |
| 2.4 裸鼠尾静脉注射转移实验 | 第56页 |
| 2.5 H&E染色 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| 3.1 ADAM22促进胃癌细胞的体内外侵袭转移 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第三部分 ADAM22对胃癌耐药细胞黏附能力的调控 | 第60-78页 |
| 引言 | 第60页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| 1.1 细胞系 | 第60页 |
| 1.2 裸鼠 | 第60页 |
| 1.3 siRNA序列 | 第60页 |
| 1.4 其他主要试剂和材料 | 第60页 |
| 1.5 主要仪器 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-68页 |
| 2.1 细胞培养 | 第61页 |
| 2.2 细胞转染 | 第61页 |
| 2.3 RNA提取 | 第61页 |
| 2.4 反转录 | 第61页 |
| 2.5 Real Time PCR | 第61页 |
| 2.6 蛋白提取 | 第61页 |
| 2.7 Western blot | 第61页 |
| 2.8 ADAM22质粒构建 | 第61-65页 |
| 2.9 细胞黏附实验 | 第65页 |
| 2.10 细胞体内黏附实验 | 第65-66页 |
| 2.11 免疫荧光 | 第66-67页 |
| 2.12 体外穿内皮实验 | 第67页 |
| 2.13 MoT 3D培养 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-76页 |
| 3.1 ADAM22不参与调控耐药细胞的EMT | 第68-69页 |
| 3.2 ADAM22增强细胞对细胞外基质蛋白的黏附 | 第69-71页 |
| 3.3 ADAM22促进肿瘤细胞在肺部的黏附驻留 | 第71-72页 |
| 3.4 ADAM22增强细胞对血管内皮细胞细胞的穿透能力 | 第72-73页 |
| 3.5 ADAM22促进肿瘤细胞在MoT 3D培养条件下的增殖 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 第四部分 ADAM22通过激活ITGB1促进胃癌细胞的侵袭转移 | 第78-92页 |
| 引言 | 第78页 |
| 1 材料 | 第78页 |
| 1.1 细胞系 | 第78页 |
| 1.2 裸鼠 | 第78页 |
| 1.3 siRNA序列 | 第78页 |
| 1.4 其他主要试剂和材料 | 第78页 |
| 1.5 主要仪器 | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-81页 |
| 2.1 细胞培养 | 第78-79页 |
| 2.2 细胞转染 | 第79页 |
| 2.3 Transwell实验 | 第79页 |
| 2.4 裸鼠尾静脉注射转移实验 | 第79页 |
| 2.5 H&E染色 | 第79页 |
| 2.6 蛋白提取 | 第79页 |
| 2.7 Western blot | 第79页 |
| 2.8 细胞黏附实验 | 第79页 |
| 2.9 免疫荧光 | 第79页 |
| 2.10 ITGB1质粒构建 | 第79页 |
| 2.11 ADAM22 Disintegrin结构域缺失质粒构建 | 第79-80页 |
| 2.12 GST Pull-down实验 | 第80页 |
| 2.13 免疫共沉淀 | 第80-81页 |
| 2.14 ITGB1激活抗体处理 | 第81页 |
| 3 结果 | 第81-90页 |
| 3.1 ADAM22对细胞黏附和细胞骨架调控相关分子表达和活性的影响 | 第81-83页 |
| 3.2 ADAM22影响ITGB1的活化 | 第83页 |
| 3.3 激活ITGB1拮抗下调ADAM22对胃癌耐药细胞黏附和侵袭转移能力的抑制 | 第83-86页 |
| 3.4 ADAM22通过Disintegrin结构域与ITGB1相互作用 | 第86-87页 |
| 3.5 Disintegrin缺失型ADAM22突变体无促进胃癌细胞侵袭转移功能 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-92页 |
| 第五部分 ADAM22通过RAC1/CDC42调控HIF1α和ABCB1促进胃癌细胞多药耐药 | 第92-99页 |
| 引言 | 第92页 |
| 1 材料 | 第92页 |
| 1.1 细胞系 | 第92页 |
| 1.2 siRNA序列 | 第92页 |
| 1.3 其他主要试剂和材料 | 第92页 |
| 1.4 主要仪器 | 第92页 |
| 2 方法 | 第92-94页 |
| 2.1 细胞培养 | 第92页 |
| 2.2 细胞转染 | 第92页 |
| 2.3 RNA提取 | 第92页 |
| 2.4 反转录 | 第92-93页 |
| 2.5 Real Time PCR | 第93页 |
| 2.6 蛋白提取 | 第93页 |
| 2.7 Western blot | 第93页 |
| 2.8 IC50测定 | 第93-94页 |
| 3 结果 | 第94-97页 |
| 3.1 下调ADAM22可以逆转多药耐药胃癌细胞对多种化疗药物的耐受 | 第94页 |
| 3.2 ADAM22影响HIF1α和ABCB1的表达 | 第94-95页 |
| 3.3 ADAM22通过Cdc42和Rac1影响胃癌耐药细胞HIF1α和ABCB1的表达和多药耐药表型 | 第95-97页 |
| 4 讨论 | 第97-99页 |
| 第六部分 胃癌组织中ADAM22和活化ITGB1高表达与患者预后不良相关 | 第99-104页 |
| 引言 | 第99页 |
| 1 材料 | 第99页 |
| 1.1 组织芯片 | 第99页 |
| 1.2 其他主要试剂和材料 | 第99页 |
| 1.3 主要仪器 | 第99页 |
| 2 方法 | 第99-100页 |
| 2.1 免疫组织化学染色 | 第99页 |
| 2.2 统计分析 | 第99-100页 |
| 3 结果 | 第100-102页 |
| 3.1 ADAM22在转移性胃癌组织中表达升高 | 第100页 |
| 3.2 ADAM22和HUTS4在胃癌组织中表达呈正相关 | 第100-101页 |
| 3.3 ADAM22和HUTS4表达可作为胃癌患者预后不良的独立预测因素 | 第101-102页 |
| 4 讨论 | 第102-104页 |
| 小结 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-124页 |
| 附录 | 第124-128页 |
| 个人简历和研究成果 | 第128-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
