| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| ·格尔德霉素简介 | 第12-13页 |
| ·格尔德霉素的抗肿瘤和抗病毒作用 | 第13-15页 |
| ·格尔德霉素生物合成途径的研究 | 第15-17页 |
| ·格尔德霉素类似物的研究进展 | 第17-19页 |
| ·液质联用技术在抗生素组分多样性中的应用 | 第19-21页 |
| ·格尔德霉素PKS ER6结构域的研究 | 第21-24页 |
| ·定点突变技术简介 | 第24-25页 |
| ·安莎类抗生素早期鉴别方法 | 第25-26页 |
| ·论文立题依据 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料 | 第28-33页 |
| ·菌种 | 第28页 |
| ·质粒 | 第28页 |
| ·特殊试剂与酶 | 第28-29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-31页 |
| ·缓冲液 | 第31-32页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第32-33页 |
| 第三章 实验方法 | 第33-38页 |
| ·色谱分析方法 | 第33页 |
| ·菌种发酵及抗菌活性的测定 | 第33页 |
| ·菌浓的测定方法-Packed volume(PCV) | 第33页 |
| ·发酵培养物的提取 | 第33页 |
| ·苯安莎类抗生素的碱性显色方法 | 第33页 |
| ·PCR反应 | 第33-34页 |
| ·TakaRa一般DNA片段的克隆实验(试剂盒) | 第34页 |
| ·大肠杆菌 E.coli DH-5α的培养 | 第34-35页 |
| ·E.coli DH-5α感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第35页 |
| ·碱变性法提取E.coli质粒 | 第35页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第35页 |
| ·限制酶切反应 | 第35-36页 |
| ·线性DNA的去磷酸化 | 第36页 |
| ·DNA电泳及片段回收 | 第36页 |
| ·DNA连接反应 | 第36页 |
| ·大肠杆菌/链霉菌的接合转移实验 | 第36-37页 |
| ·链霉菌总DNA提取方法 | 第37页 |
| ·微波法提取链霉菌总DNA | 第37-38页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第38-62页 |
| 第一部分 格尔德霉素制品的分析与初步鉴定 | 第38-46页 |
| ·格尔德霉素制品的液相分析 | 第38页 |
| ·LC-MS-MS鉴别格尔德霉素制品中的4,5-双氢格尔德霉素 | 第38-41页 |
| ·格尔德霉素发酵液中4,5-双氢格尔德霉素和氢醌型格尔德霉素发现与鉴别 | 第41-45页 |
| ·吸水链霉菌17997的生长与合成GDM的研究 | 第41-43页 |
| ·TLC鉴别格尔德霉素发酵液中4,5-双氢格尔德霉素和氢醌型格尔德霉素 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第二部分 格尔德霉素生物合成中4,5位C-C双键形成基因的研究 | 第46-62页 |
| ·PKS module 6序列的获得 | 第46-47页 |
| ·引物设计及PCR扩增同源臂 | 第47-54页 |
| ·接合转移系统的建立 | 第54-56页 |
| ·质粒pGH112的接合转移 | 第54-55页 |
| ·重组载体的构建 | 第55-56页 |
| ·单交换基因阻断株的获得 | 第56-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-78页 |
| 已发表文章 | 第78页 |
