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FoxO1调控猪骨骼肌纤维类型转化的初步研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
文献综述第11-25页
 第一章 FoxO 家族概述第11-16页
   ·FoxO 转录因子的结构与基因表达第11-12页
     ·Fox 的命名与分类第11-12页
     ·FoxO 的结构特点及FoxO 的染色体定位第12页
   ·FoxO 1 转录活性的调节第12-13页
   ·FoxO 1 的生物学功能第13-16页
     ·FoxO1 与成肌细胞分化关系第14页
     ·FoxO1 在肌纤维类型转化中的作用第14-16页
 第二章 骨骼肌纤维类型的转化第16-25页
   ·肌纤维的起源第16页
   ·肌纤维的组成结构第16-17页
   ·肌纤维生长发育的基本原理第17-18页
   ·肌管形成的转录控制第18页
   ·肌纤维类型第18-20页
     ·肌纤维的分类第18-19页
     ·成肌细胞分化的基本过程第19-20页
     ·成肌表型分化第20页
   ·影响肌纤维类型分布的关键基因第20-22页
     ·生肌调节因子第21页
     ·生肌蛋白第21页
     ·肌肉生长抑制素第21-22页
     ·过氧化物增殖体激活物受体γ协同激活物第22页
     ·肌细胞增强子-2第22页
   ·肌纤维类型的转化第22-25页
     ·肌纤维类型转换的调控机理第22-23页
     ·FoxO1 对肌纤维类型转换的作用第23页
     ·研究肌纤维类型转换的意义第23-25页
试验研究第25-59页
 第三章 肌纤维类型分化相关基因的组织表达差异第25-37页
   ·材料与方法第25-32页
     ·实验动物第25页
     ·试剂和仪器第25页
     ·总RNA 提取第25-26页
     ·除去RNA 中的基因组DNA第26页
     ·反转录第26-27页
     ·PCR 反应第27-29页
     ·蛋白的提取及Western blot 检测第29-32页
   ·结果与分析第32-35页
     ·猪的四种骨骼肌组织中总RNA 的提取第32页
     ·猪四种骨骼肌组织中总RNA 和总蛋白的定量结果第32-33页
     ·反应循环次数的确定第33页
     ·各基因在猪四种骨骼肌组织中的表达第33-35页
     ·FoxO1 蛋白在猪骨骼肌组织中的表达第35页
   ·讨论第35-37页
 第四章 FoxO1 及肌纤维类型相关基因在成肌细胞分化过程中的表达变化第37-46页
   ·材料与方法第37-40页
     ·材料第37-38页
     ·试验方法第38-40页
   ·结果第40-44页
     ·原代培养成肌细胞的形态学观察第40页
     ·原代培养猪成肌细胞生长曲线绘制第40-41页
     ·含2%血清的分化培养基处理成肌细胞后的形态学观察第41-42页
     ·猪骨骼肌成肌细胞分化时相关基因的表达变化第42-44页
   ·讨论第44-46页
 第五章 FoxO1 去磷酸化对猪成肌细胞分化为不同类型肌纤维的影响第46-50页
   ·材料与方法第46-47页
     ·实验材料第46页
     ·实验方法第46-47页
   ·结果与分析第47-48页
     ·Wortmannin 对骨骼肌成肌细胞中FoxO1 表达的影响第47页
     ·Wortmannin 对骨骼肌成肌细胞中MyHCs 表达的影响第47-48页
     ·Wortmannin 对骨骼肌成肌细胞中NFAT 和Mef2c 表达的影响第48页
   ·讨论第48-50页
 第六章 猪FoxO1 基因RNAi 慢病毒载体的构建第50-59页
   ·材料与方法第50-51页
     ·主要试剂与细胞系第50-51页
     ·主要溶液的配制第51页
   ·猪FoxO1 SHRNA 慢病毒载体的构建第51-54页
     ·猪FoxO1 siRNA 引物设计第51-52页
     ·复性(退火)引物合成双链DNA(shRNA)第52页
     ·线性化载体第52页
     ·载体酶切产物的回收第52-53页
     ·连接第53页
     ·重组质粒的转化、提取和检测第53-54页
   ·结果第54-58页
     ·单链寡核苷酸退火产物电泳分析第54-55页
     ·空载体质粒检测第55页
     ·酶切产物检测第55页
     ·阳性克隆的测序鉴定第55-58页
   ·讨论第58-59页
参考文献第59-66页
致谢第66-67页
作者简介第67页

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