| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-18页 |
| 缩略词语 | 第18-21页 |
| 第一部分 高羊茅FACHIT1基因的克隆及其表达调控研究 | 第21-119页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-40页 |
| 1 植物几丁质酶的分子生物学研究进展 | 第21-27页 |
| ·植物几丁质酶的分布定位 | 第22页 |
| ·植物几丁质酶的类型及其结构特征 | 第22-25页 |
| ·Ⅰ类和Ⅱ类几丁质酶 | 第22-24页 |
| ·Ⅲ类几丁质酶 | 第24页 |
| ·Ⅳ类、Ⅴ类、Ⅵ类及Ⅶ类几丁质酶 | 第24-25页 |
| ·植物几丁质酶的功能 | 第25-27页 |
| ·抗真菌活性 | 第25-26页 |
| ·参与植物的发育调控 | 第26页 |
| ·其它一些功能 | 第26-27页 |
| ·植物几丁质酶基因的结构 | 第27-28页 |
| ·植物几丁质酶基因的表达调控 | 第28-34页 |
| ·植物几丁质酶的应用前景 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的、意义和内容 | 第35-40页 |
| 第二章 高羊茅FACHIT1基因cDNA的克隆及其诱导表达 | 第40-72页 |
| ·材料和试剂 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·其它有关材料及试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-58页 |
| ·植物材料与处理 | 第41页 |
| ·总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第42-43页 |
| ·高羊茅FaChitl基因cDNA保守片段的克隆 | 第43-48页 |
| ·RT-PCR简并引物的设计 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR反应体系及程序 | 第44页 |
| ·RT-PCR反应产物的回收 | 第44-45页 |
| ·扩增DNA片段与载体的连接 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·质粒DNA的大肠杆菌转化 | 第46页 |
| ·重组质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·重组质粒DNA的限制性酶切检测 | 第47-48页 |
| ·扩增DNA片段的序列测定及分析 | 第48页 |
| ·RACE扩增cDNA的3'末端 | 第48-50页 |
| ·引物设计及原理 | 第48页 |
| ·反转录反应 | 第48-49页 |
| ·嵌套式PCR反应 | 第49-50页 |
| ·Outer PCR反应 | 第49-50页 |
| ·Inner PCR反应 | 第50页 |
| ·PCR反应产物的回收、克隆、测序及分析 | 第50页 |
| ·RACE扩增cDNA的5'末端 | 第50-55页 |
| ·引物设计及原理 | 第50-51页 |
| ·去磷酸化处理 | 第51页 |
| ·去除mRNA的5'帽子结构 | 第51-52页 |
| ·5'RACE adaptor的连接 | 第52-53页 |
| ·反转录反应 | 第53-54页 |
| ·嵌套式PCR反应 | 第54-55页 |
| ·Outer PCR反应 | 第54页 |
| ·Inner PCR反应 | 第54-55页 |
| ·PCR反应产物的回收、克隆、测序及分析 | 第55页 |
| ·RNA blotting检测FaChitl基因的表达 | 第55-58页 |
| ·杂交探针的制备 | 第55页 |
| ·Northern blotting | 第55-58页 |
| ·RNA变性凝胶电泳 | 第55-56页 |
| ·碱性条件下RNA向尼龙膜的毛细管转移 | 第56-57页 |
| ·杂交 | 第57页 |
| ·杂交信号的检测 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-70页 |
| ·总RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·FaChitl基因eDNA保守片段的克隆 | 第59-61页 |
| ·FaChitl基因cDNA保守片段的测序结果分析 | 第60-61页 |
| ·高羊茅FaChitl基因cDNA全长序列的克隆 | 第61-62页 |
| ·FaChitl的CDS(Conserved Domain Sequence)搜索结果 | 第62-63页 |
| ·FaChitl基因核苷酸及其对应的氨基酸序列 | 第63-65页 |
| ·同源性及其保守结构域分析 | 第65-68页 |
| ·系统进化树 | 第68-69页 |
| ·FaChitl基因的表达分析 | 第69-70页 |
| ·FaChitl基因在根及叶片组织中对真菌激发子诱导的反应 | 第69页 |
| ·FaChitl基因在根及叶片组织中对乙烯、渗透以及机械损伤等胁迫处理的表达反应 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第三章 高羊茅FACHIT1基因组DNA的克隆及其拷贝数的验定 | 第72-87页 |
| ·材料和试剂 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·其它有关材料及试剂 | 第72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-79页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第72-73页 |
| ·FaChitl启动子序列的克隆 | 第73-77页 |
| ·BD Genome Walker~(TM)染色体步移原理 | 第73-74页 |
| ·BD Genome Walker~(TM) DNA文库的构建 | 第74-76页 |
| ·BD Genome Walker~(TM)染色体步移 | 第76-77页 |
| ·PCR反应产物的回收、克隆、测序及分析 | 第77页 |
| ·FaChitl基因组3'非翻译区(3'UTR)的克隆 | 第77页 |
| ·FaChitl基因组序列的克隆 | 第77-78页 |
| ·Southern blotting检测FaChitl基因的拷贝数 | 第78-79页 |
| ·杂交探针的制备 | 第78页 |
| ·Southern blotting检测 | 第78-79页 |
| ·DNA的限制性酶切及电泳 | 第78页 |
| ·碱性条件下DNA向尼龙膜的毛细管转移 | 第78-79页 |
| ·杂交 | 第79页 |
| ·杂交信号的检测 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-85页 |
| ·FaChitl基因启动子的克隆及序列分析 | 第79-82页 |
| ·FaChitl 3'非翻译区基因组序列的克隆与分析 | 第82-83页 |
| ·FaChitl基因组序列的克隆与分析 | 第83-84页 |
| ·FaChitl基因的拷贝数 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第四章 高羊茅FACHIT1启动子的功能分析 | 第87-105页 |
| ·材料和试剂 | 第87-88页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·其它有关材料及试剂 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-93页 |
| ·不同长度FaChitl基因启动子与GUS基因融合植物表达载体的构建 | 第88页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第88-89页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第88页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第88-89页 |
| ·农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第89-90页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第90页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交鉴定 | 第90-91页 |
| ·转基因烟草的DNA提取 | 第90页 |
| ·DNA的限制性酶切和电泳 | 第90-91页 |
| ·杂交探针的制备 | 第91页 |
| ·Southern杂交检测 | 第91页 |
| ·转基因烟草的GUS荧光活性分析 | 第91-93页 |
| ·转基因烟草的胁迫处理 | 第91页 |
| ·转基因烟草的GUS荧光活性测定 | 第91-93页 |
| ·新鲜转基因烟草叶片组织GUS蛋白的提取 | 第91页 |
| ·GUS酶反应 | 第91-92页 |
| ·荧光测定 | 第92页 |
| ·GUS提取液蛋白含量测定 | 第92-93页 |
| ·酶活力计算 | 第93页 |
| ·结果与分析 | 第93-103页 |
| ·不同长度的FaChitl启动子与GUS基因融合表达载体 | 第93-95页 |
| ·含不同长度FaChitl启动子转基因烟草的获得及分子鉴定 | 第95-98页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第95-96页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交鉴定 | 第96-98页 |
| ·不同长度FaChitl启动子对多种胁迫的应答特征 | 第98-102页 |
| ·不同长度FaChitl启动子对真菌激发子(Fungal elicitor)的应答特征 | 第98-100页 |
| ·不同长度FaChitl启动子对干旱胁迫的反应 | 第100-101页 |
| ·不同长度FaChitl基因启动子对乙烯胁迫的反应 | 第101页 |
| ·不同长度FaChitl启动子对机械损伤胁迫的反应 | 第101-102页 |
| ·pFaChitlP-Ⅰ转化系烟草中GUS基因的mRNA表达水平 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-105页 |
| 第一部分小结 | 第105-106页 |
| 参考文献(REFERENCES) | 第106-119页 |
| 第二部分 一个新型的DNA生物传感器在转基因植物检测上的应用研究 | 第119-150页 |
| 1 综述 | 第119-125页 |
| ·检测转基因植物的常规方法 | 第119-120页 |
| ·DNA生物传感器 | 第120-123页 |
| ·光学DNA生物传感器 | 第121页 |
| ·声波DNA生物传感器 | 第121-122页 |
| ·电化学DNA生物传感器 | 第122-123页 |
| ·电化学DNA生物传感器的应用现状 | 第123-124页 |
| ·研究内容、目的和意义 | 第124-125页 |
| 2 实验和方法 | 第125-131页 |
| ·试剂及材料 | 第125-126页 |
| ·目标序列的PCR扩增 | 第126-127页 |
| ·DNA生物传感器在金电极表面的组装 | 第127-131页 |
| ·金电极表面的生物化修饰 | 第127-128页 |
| ·金电极表面的杂交 | 第128页 |
| ·链亲和素与信号探针的结合 | 第128页 |
| ·过氧化氢酶的生物素化标记 | 第128页 |
| ·生物素化标记的过氧化氢酶与链亲和素的结合 | 第128-129页 |
| ·电化学信号的检测 | 第129-131页 |
| 3 结果与分析 | 第131-142页 |
| ·金电极表面聚苯胺的循环伏安值 | 第131-132页 |
| ·传感器组装中各参数的优化 | 第132-135页 |
| ·捕获探针浓度的优化 | 第132页 |
| ·信号探针浓度的优化 | 第132-133页 |
| ·链亲和素浓度的优化 | 第133页 |
| ·生物素及过氧化氢酶浓度的优化 | 第133-135页 |
| ·生物传感器对序列检测的特异性验定 | 第135-138页 |
| ·生物传感器对序列检测的灵敏度 | 第138-140页 |
| ·PCR产物的Southern杂交验定 | 第140-142页 |
| 4 讨论 | 第142-143页 |
| 5 第二部分小结 | 第143-145页 |
| 参考文献(References) | 第145-150页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
