| 目录 | 第1-6页 |
| 卷首语 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略语对照表 | 第11-13页 |
| 第一部分 FcαR内吞机制研究 | 第13-50页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 实验结果 | 第19-33页 |
| 1.FcαR在U937细胞中的内吞途径 | 第19-20页 |
| 2.FcαR在转染的CHO细胞中的内吞途径 | 第20页 |
| 3.Eps15负显性突变体能抑制FcαR内吞 | 第20-23页 |
| 4.使用RNA干扰技术抑制CHC表达水平后FcαR内吞减少 | 第23-26页 |
| 5.FcαR内吞后进入Rab5和Rab11阳性内体,但FcαR内吞不受Rab5调控 | 第26-27页 |
| 6.FcαR内吞依赖于dynamin | 第27-28页 |
| 7.FcαR的内吞基序不在膜内区 | 第28-33页 |
| 讨论 | 第33-36页 |
| 材料和方法 | 第36-41页 |
| 1.抗体和试剂 | 第36页 |
| 2.质粒 | 第36页 |
| 3.细胞培养和转染 | 第36-37页 |
| 4.使用化学抑制剂抑制不同的内吞途径 | 第37页 |
| 5.流式细胞术 | 第37-38页 |
| 6.免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜分析 | 第38-39页 |
| 7.转铁蛋白内吞实验 | 第39页 |
| 8.RNA干扰 | 第39页 |
| 9.Western blot | 第39-40页 |
| 10.统计分析 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 第二部分 FcαR脱落机制研究 | 第50-72页 |
| 前言 | 第51-54页 |
| 实验结果 | 第54-61页 |
| 1.PMA诱导FcαR从U937细胞脱落 | 第54页 |
| 2.金属蛋白酶能抑制FcαR脱落 | 第54-56页 |
| 3.FcαR在CHO和RBL稳定株中脱落 | 第56-58页 |
| 4.ADAM10和ADAM17参与FcαR从293T细胞脱落 | 第58页 |
| 5.U937细胞中FcαR脱落与ADAM10和ADAM17有关 | 第58-61页 |
| 讨论 | 第61-63页 |
| 材料和方法 | 第63-67页 |
| 1.抗体和试剂 | 第63页 |
| 2.检测sFcαR的ELISA系统 | 第63页 |
| 3.质粒 | 第63-64页 |
| 4.细胞培养和转染 | 第64页 |
| 5.慢病毒包装和感染靶细胞 | 第64页 |
| 6.FcαR脱落检测 | 第64-65页 |
| 7.Western blot | 第65页 |
| 8.实时定量PCR | 第65页 |
| 9.统计分析 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 综述 | 第72-116页 |
| 常规实验材料和实验方法 | 第80-116页 |
| 一、实验材料 | 第80-84页 |
| (一)主要化学试剂 | 第80页 |
| (二)抗体 | 第80-81页 |
| (三)实验动物 | 第81页 |
| (四)细胞系 | 第81页 |
| (五)工具酶、分子量标准及试剂盒 | 第81页 |
| (六)质粒载体 | 第81-82页 |
| (七)菌株 | 第82页 |
| (八)构建克隆的通用引物 | 第82页 |
| (九)仪器设备 | 第82-83页 |
| (十)软件 | 第83-84页 |
| 二、实验方法 | 第84-116页 |
| [分子生物学相关实验] | 第84-94页 |
| (一)常规表达质粒构建 | 第84-86页 |
| (二)FcαR的原核表达 | 第86-89页 |
| (三)Fcγ链和FcαR膜内区可溶性GST融合蛋白的表达纯化 | 第89-90页 |
| (四)实时定量PCR(quantitative real-time PCR) | 第90-92页 |
| (五)哺乳动物细胞转染 | 第92页 |
| (六)表达FcαR CHO细胞稳定株筛选 | 第92-94页 |
| [常规免疫学相关实验] | 第94-106页 |
| (一)兔抗FcαR多克隆抗体的制备、纯化和鉴定 | 第94-96页 |
| (二)兔抗cFaR膜内区和FcY链多克隆抗体的制备和纯化 | 第96页 |
| (三)用NIP抗原柱提纯抗体 | 第96-97页 |
| (四)抗体F(ab′)_2片段的制备及纯化 | 第97页 |
| (五)荧光流式细胞分析技术(FACS) | 第97-98页 |
| (六)激光扫描共聚焦显微镜 | 第98-99页 |
| (七)酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第99-101页 |
| (八)蛋白质的SDS-PAGE梯度凝胶电泳 | 第101-102页 |
| (九)半干法Western Blot(蛋白印迹) | 第102-103页 |
| (十)湿转法Western Blot(蛋白印迹) | 第103-106页 |
| [常规生物化学方法] | 第106-111页 |
| (一)免疫沉淀(IP) | 第106页 |
| (二)慢病毒包装和感染靶细胞 | 第106-107页 |
| (三)荧光标记方法 | 第107-108页 |
| (四)HPR标记抗体 | 第108-109页 |
| (五)生物素标记抗体 | 第109页 |
| (六)抗体亲和柱的制备 | 第109-110页 |
| (七)蛋白质浓度测定 | 第110-111页 |
| [免疫学及细胞生物学功能研究实验] | 第111-116页 |
| (一)外周单核细胞分离 | 第111-112页 |
| (二)外周血中性粒细胞的分离 | 第112-113页 |
| (三)中性粒细胞颗粒组分的分离 | 第113-114页 |
| (四)效应细胞对靶细胞的吞噬(ADCP) | 第114-116页 |
| 附录 | 第116-120页 |
| 附录Ⅰ 质粒载体图谱和多克隆位点 | 第116-118页 |
| 附录Ⅱ 本研究中使用主要引物的序列 | 第118-119页 |
| 附录Ⅲ 攻读博士学位期间发表的文章 | 第119-120页 |
| 发表论文 | 第119页 |
| 会议摘要 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 个人简历 | 第121-122页 |
